D-虫荧光素钠盐

库存 ：58

英文名 ：D-Luciferin, sodium salt

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海西格

保存条件 ：低温保存

规格 ：1 mg 25 mg 100 mg

 

 
操作步骤 :
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
       引物1（10pM）               2μl
       引物2（10PM）              2μl
       Taq酶（2U/μl）            1μl
      DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
      加ddH2O至               50 μl
    视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
产品名称: D-虫荧光素钠盐
英文名称　D-Luciferin, sodium salt
规格:  1 mg 25 mg  100 mg  
分类 　PCR荧光核酸试剂
下面就向大家介绍实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR反应鉴定——PCR反应条件:

循环步骤	温度	时间	循环数
预变性	94℃	5   min	1
变性	94℃	10   sec	30-40
退火	50-65℃	20   sec	30-40
延伸	72℃	30   sec/kb	30-40
终延伸	72℃	5   min	1

PCR实验步骤
典型的PCR由
（1）高温变性模板；
（2）引物与模板退火；
（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。
以下是D-虫荧光素钠盐的相关产品：
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Methyl levulinate  中文名：  分子式：    猪白介素1βelisa试剂盒   猪白介素1β试剂盒   规格型号：96T/48T   猪白介素1β试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：猪白介素1β试剂盒、猪白介素1βeisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
小鼠抗小核糖核蛋白/SM抗体   英文名称：   Mouse Small Nuclear Ribonucleoprotein Polypeptide/Sm   规格：   48T/96T   英文缩写：   sNP/SM  Clerosterol glucoside  中文名：赤桐甾醇葡萄糖苷  分子式：C35H58O6  度：93.0%
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小鼠抗透明带抗体elisa试剂盒   小鼠抗透明带抗体试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠抗透明带抗体试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠抗透明带抗体试剂盒、小鼠抗透明带抗体eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Erlotinib  中文名：埃罗替尼  分子式：C22H23N3O4  度：98.0%
小鼠抗透明带抗体(aZP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  Ergosterol peroxide glucoside  中文名：过氧化麦角甾醇葡萄糖苷  分子式：C34H54O8  度：85.0%
小鼠抗酸性0酸酶elisa试剂盒   小鼠抗酸性0酸酶试剂盒   规格型号：96T/48T   小鼠抗酸性0酸酶试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：小鼠抗酸性0酸酶试剂盒、小鼠抗酸性0酸酶eisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  Ergosterol peroxide  中文名：过氧化麦角甾醇  分子式：C28H44O3  度：96.0%
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兔子雌二醇(E2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose  202337-44-8  中文名：6-O-对羟基苯甲酰葡萄糖  分子式：C13H16O8 
兔子肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISA试剂盒   96T/48T   试剂盒   组装/原装           6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose  中文名：6-O-对羟基苯甲酰葡萄糖  分子式：C13H16O8 
兔子肠脂肪酸结合蛋白(iFABP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T  6-Hydroxystigmasta-4,22-dien-3-one  中文名：  分子式：C29H46O2  度：%
兔子层连蛋白elisa试剂盒   兔子层连蛋白试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子层连蛋白试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子层连蛋白试剂盒、兔子层连蛋白elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。  5-Hydroxymethylfurfural  67-47-0  中文名：5-羟甲基糠醛  分子式：C6H6O3
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3,3-Dimethylacrylic acid  中文名：千里光酸  分子式：C5H8O2  度：98.0%  兔子胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           
Campsiketalin  中文名：  分子式：C10H20O4  度：95.0%  兔子内皮抑素elisa试剂盒   兔子内皮抑素试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子内皮抑素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子内皮抑素试剂盒、兔子内皮抑素elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
Macranthoin G  中文名：灰毡毛忍冬素G  分子式：C26H26O12  度：97.0%  兔子甲状腺素elisa试剂盒   兔子甲状腺素试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子甲状腺素试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子甲状腺素试剂盒、兔子甲状腺素elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
5-O-Ethylcleroindicin D  中文名：  分子式：C10H16O4  度：%  兔子凝血因子Ⅱelisa试剂盒   兔子凝血因子Ⅱ试剂盒   规格型号：96T/48T   兔子凝血因子Ⅱ试剂盒，规格型号：96T/48T，来源：elisa试剂盒（进口分装），产品别名：兔子凝血因子Ⅱ试剂盒、兔子凝血因子Ⅱ elisa试剂盒   保存条件：2-8℃   保质期：6个月。
PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。