文献支持显色基质法鲎试剂盒|显色基质法鲎试剂盒

保存条件 ：RT,2-8℃，-20℃

保质期 ：1年

英文名 ：ITTABIO

库存 ：36

供应商 ：北京伊塔生物科技有限公司

CAS号 ：133-2110-8309

规格 ：10T

显色基质法鲎试剂盒|显色基质法鲎试剂盒，显色基质法鲎试剂盒|显色基质法鲎试剂盒，货号：YT6632，品牌：伊塔生物，规格：10T，单位：盒！更多产品：英文名称：ITTABIO,CAS:133-2110-8309 纯度≥98%分子式：C₄₂H₇₂O_14，分子量：801.01，溶解性：DMSO，鉴定方法：液相，性状：白色粉末，熔点：194-197℃，密度：1.33g/cm3，保存条件：2-8℃ 避光，运输料件：2-8℃，保质期：3年，产地：中国，类别：生化试剂，库存：23，用途：仅用于科研实验  Phosphodiesterase I 使用方法： 参考官网：ittabio.com 
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产地	国产/进口
供应商	北京伊塔生物科技有限公司
联系人	刘欣
电话/微信	13321108309
QQ	2460994656

使用说明：参考官方网站
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超氧化物歧化酶（SOD）活性检测试剂盒说明书  可见分光光度法
注意：实验之前建议选择2-3 个预期差异大的样本做预实验。如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。
货号：YT6473 规格：50T/24S
产品内容：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。
提取液：液体 60mL×1 瓶，4℃保存；
试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；
试剂二：液体 160μL×1 支，4℃保存；使用前先离心再吹打混匀。
试剂三：液体 11mL×1 瓶，4℃保存；
试剂四：粉剂×1 瓶，4℃保存；
试剂五：液体 2mL×1 瓶，4℃保存；临用前将试剂四加入试剂五中，并震荡溶解。
产品说明：
SOD（EC 1.15.1.1）是一种广泛存在于生物体内的金属酶，是重要的氧自由基清除剂，能催化超氧化物阴离子发生岐化作用，生成 H2O2和O2。SOD不仅是超氧化物阴离子清除酶，也是H2O2主要生成酶，在生物抗氧化系统中具有重要作用。通过黄嘌呤及黄嘌呤氧化酶反应系统产生超氧阴离子(O2- )，O2- 可还原氮蓝四唑生成蓝色甲臜，后者在560nm处有吸收；SOD可清除O2- ，从而抑制了甲臜的形成；反应液蓝色越深，说明SOD 活性愈低，反之活性越高。
试验中所需的仪器和试剂：
 可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵/匀浆器、冰和蒸馏水
操作步骤：
一、样本处理：（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）
1. 细菌或培养细胞样本：收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清，按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为500-1000:1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提取液） 超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20%或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次），8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2. 组织样本：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为1:5-10 的比例（建议称取约0.1g 组织，加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆；8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3. 血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1. 分光光度计预热30min 以上，调节波长至560nm，蒸馏水调零。
2. 测定前将试剂一、三和五37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴5min 以上。
3. 样本测定（在EP管中加入下列试剂）

试剂名称（μL）	测定管	对照管	空白管 1	空白管 2
样本（μL）	90	90	-	-
试剂一（μL）	240	240	240	240
试剂二（μL）	6	-	6	-
试剂三（μL）	180	180	180	180
蒸馏水（μL）	480	486	570	576
试剂五（μL）	30	30	30	30

充分混匀，37℃水浴30min 后，置于1mL 玻璃比色皿测定560nm 下的吸光度，分别记为A 测定、A 对照、A1 空白、A2 空白，计算ΔA 测定=A 测定-A 对照，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白。如底部有沉淀，混匀后再行测定。（空白管1 和空白管2 各只需做1~2 管，每个样本有一个对照管）。
三、SOD 活性计算：
1、抑制百分率的计算：
抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白× 100%尽量使样本的抑制百分率在30-70%范围内，越靠近50%越准确。如果计算出来的抑制百分率小于30%或大于70%，则通常需要调整加样量后重新测定。如果测定出来的抑制百分率偏高，则需适当稀释样本；如果测定出来的抑制百分率偏低，则需重新准备浓度比较高的待测样本。
2、、SOD 酶活性单位：在上述黄嘌呤氧化酶偶联反应体系中抑制百分率为50%时，反应体系中的SOD 酶活力定义为一个酶活力单位。
3、SOD 酶活性计算：
（1）血清（浆）SOD 活性(U/mL)=[抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷V 样×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×F
（2）组织、细菌或培养细胞SOD 活力计算：A 按样本蛋白浓度计算SOD 活性(U/mg prot)=[抑制百分率÷（1-抑制百分率）×V 反总]÷（V 样×Cpr）×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷Cpr×F
B 按样本质量计算SOD 活性(U/g 质量)=[抑制百分率÷(1 -抑制百分率)×V 反总]÷(W×V 样÷V 样总)×F=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W×FC 按细菌或细胞数量计算SOD 活力(U/104 cell)= [抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总]÷(500×V 样÷V 样总)×F=0.0228×抑制百分率÷(1-抑制百分率)×FV 反总：反应体系总体积，1.026mL；V 样：加入反应体系中样本的体积，0.09mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细胞或细菌总数，500 万，F：样本稀释倍数。
注意事项：
1、样本和试剂二使用时在冰上放置。
2、样本较多时，可按表格配制工作液（包含试剂一、二、三），试剂五必须最后加入。
3、反应完成后，可能有沉淀生成，混匀后测定即可。
实验实例：
1、取0.1g 稗草加入1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA 测定=A 测定-A 对照=0.335-0.012=0.323，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白=0.957-0.003=0.954，抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白×100%=72%，按样本质量计算酶活得：SOD 活性(U/g 质量)=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=293.14 U/g 质量。
2、取0.1g 大鼠脾加入1mL 提取液进行匀浆研磨，取上清之后按照测定步骤操作，测得计算ΔA 测定= A 测定-A对照=0.563-0.213=0.35，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白=0.957-0.003=0.954，抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白× 100% =63.31%，按样本质量计算酶活得：SOD 活性(U/g 质量)=11.4×抑制百分率÷(1-抑制百分率) ÷W=196.71 U/g 质量。
3、取1000 万细胞，加入1mL 提取液提取离心，之后再按照测定步骤操作，测得计算ΔA 测定=A 测定-A 对照=0.614-0.015=0.599，ΔA 空白=A1 空白-A2 空白=0.944-0.005=0.939，抑制百分率=(ΔA 空白-ΔA 测定) ÷ΔA 空白× 100% =36.21%，按细菌或细胞数量计算酶活得：SOD 活性(U/104 cell)=抑制百分率÷(1-抑制百分率)×V 反总] ÷(1000×V 样÷V 样总)=0.0065 U/104 cell。
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