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库存 :20
英文名 :NP80 Transfection Reagent
供应商 :上海觅拓生物科技有限公司
保存条件 :4度
规格 :1ML
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NP80TM Transfection Reagent
货号:QS-1122-10
NP80TM Transfection Reagent
货号:QS-1122-10
款新型核酸转染试剂)
【产品参数】
浓度 | 1mg/mL |
规格 | 1mL |
保存条件 | 4℃ |
【使用方法】
RNAi 或 siRNA 转染
本说明书适用于 24 孔培养板的转染实验,其他规格的培养板的用量参照下面表格,表格给出的是每孔的用量与体积。
RNAi 或 siRNA 转染
本说明书适用于 24 孔培养板的转染实验,其他规格的培养板的用量参照下面表格,表格给出的是每孔的用量与体积。
- 细胞接种:转染前一天接种细胞,每孔 500 μl 培养基(无抗生素),接种细胞密度在 30-50%。
- RNAi(siRNA)-NP80 混合物准备:
- 20 pmol siRNA 用 50μl 无血清培养基稀释。
- 2μl NP80 用 50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀,室温孵育 5min。(注意:确保在 25min 内执行第三步操作,不要过于延迟)
- 孵育 5min 后,将 siRNA 稀释液与NP80 稀释液混合(总体积 100μl)。轻轻混匀,室温孵育 20 min。
- 将 RNAi 混合物加到培养的细胞内。
- 将 100μl 混合物加入培养孔内,培养孔内含有 0.5ml 培养的细胞。轻轻晃动培养板,混匀。
- 37°C 培养 18-72h,检测基因抑制效果。如果需要,细胞培养 4-6h 时可以更换培养基。孵育时间的长短,取决于细胞类型、所干扰基因本身及分析方法。可设置不同的孵育时间进行实验以确定最佳孵育时间
- 转染过程不可添加抗生素,否则会导致细胞死亡;
- 首次实验 RNAi 或 siRNA 的用量可稍大,后续实验根据实验结果修改。
RNAi 或 siRNA 转染实验优化
为了提高转染效率,最好对转染条件进行优化,特别是首次使用。例如:24 孔培养板,调整 RNAi 或 siRNA 与 NP80 试剂的用量。siRNA 用量在 10-50 pmol 之间调整,NP80 试剂用量在 0.5-1.5μl 之间调整。客户可按照、 用量进行预实验,适当调整转染试剂用量。质粒 DNA 转染
使用以下步骤将 DNA 在 24 孔板内转染到哺乳动物细胞中。所有的数量和体积是基于一个孔给出的。对于大多数细胞系使用 1:2 到 1:3 比例的 DNA (μg)和 NP80(μl)制备复合物。- 贴壁细胞:转染前 1 天,将 0.5-2×105 个细胞置于 500μL 不含抗生素的生长培养基中,使细胞在转染时融合率达到 70-90%。悬浮液细胞:在制备混合物之前,将 4- 8x105 个细胞置于不含抗生素的 500 μl 生长培养基中。
- 对于每个转染样品,准备混合物如下:
- 在不含血清的 Opti-MEM I Reduced Serum Medium(或其他不含血清的培养基)。
- 使用前将NP80 在 50 μl Opti-MEM I 培养基中稀释,室温孵育 5 分钟。
- 孵育 5 分钟后,将稀释后的DNA 与稀释后的 NP80(总体积 100 μl)结合。轻轻混合,在室温下孵育 20 分钟
- 在含细胞和培养基的每个孔中加入 100 μl 的混合物,摇匀。
- 将细胞置于 37℃的 CO2 培养箱中培养 18-48 小时,检测转基因表达情况。培养基可在 4-6 小时后更换。
优化质粒 DNA 转染
为了获得高效的转染效率和较低的细胞毒性,可以通过改变细胞密度以及优化 DNA 和 NP80 浓度转染条件。确保细胞融合度大于 90%,将DNA (μg): NP80 (μl)的比例从 1:0.5 到 1:5 进行调整。NP80 Transfection Reagent Formats for Various Cell Culture Vessels | |||||||
Culture vessel |
Surface area/well (cm2) |
Vol. of growth medium (µl) |
Vol. of dilution medium (µl) |
RNAi 或 siRNA (pmol) |
NP80 (µl) |
DNA (µg) |
NP80 (µl) |
96-well | 0.3 | 100 | 2 x 10 | 5 | 0.5 | 0.2 | 0.5 |
48-well | 0.8 | 250 | 2 x 25 | 10 | 1 | 0.4 | 1 |
24-well | 2 | 500 | 2 x 50 | 20 | 2 | 0.8 | 2 |
12-well | 4 | 1000 | 2 x 100 | 40 | 4 | 1.6 | 4 |
6-well | 10 | 2000 | 2 x 250 | 100 | 10 | 4 | 10 |
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