人α1抗胰蛋白酶ELISA检测试剂盒说明书

供应商 ：上海西格

库存 ：39

样本 ：体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等等

标记物 ：详见说明书

适应物种 ：大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、等动植物

应用 ：ELISA检测

检测方法 ：详见说明书

检测限 ：用于检测血浆，血清及相关液体等样本

规格 ：48T/96T

产品名称：人α1抗胰蛋白酶ELISA检测试剂盒说明书
英文名称：α1-Antitrypsin
检测范围：125μg/mL~4000μg/mL
灵敏度：10
规格：96T/48T 
保存；2-8℃。
检测目的：用于检测血浆，血清及相关液体等样本。例如灌洗液、脑脊液、血清、血浆、尿液、胸腹水、细胞培养上清、组织匀浆等标本.
检测种属：大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛、马铃薯、鹿、羊、鸡、鸭、鱼、人、等动植物。
 

 
实验流程:
1. 实验前标准品、试剂及样本的准备；
2. 加样（标准品及样本）100µL，37°C孵育1小时；
3. 吸弃，加检测溶液A100µL，37°C孵育1小时；
4. 洗板3次；
5. 加检测溶液B100µL，37°C孵育30分钟；
6. 洗板5次；
7. 加TMB底物90µL，37°C孵育10-20分钟；
8. 加终止液50µL，立即450nm读数。
备试剂与收集血样：
1.  收集标本：血清、血浆（EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝）、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测， 2-8 ℃ 保存48 小时；更长时间须冷冻（ -20   ℃或 -70   ℃ ）保存，避免反复冻融。
2.  标准品液配制：使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀，配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管，管加标本稀释液 900ul ，第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ，移至第二管 。如此反复作对倍稀释，从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。
3.  10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释（ 示例： 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水）。
4.  洗涤液：用重蒸水 1:20 稀释（示例：1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水）
检测程序：
1.  加样：每孔各加入标准品或待测样品 100ul ，将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2.  洗板：用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次，向滤纸上印干。
3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4.  洗板：同前。
5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
6.  洗板：同前。
7.  每孔加入底物工作液100ul ，置 37   ℃ 暗处反应15 分钟。
8.  每孔加入100ul 终止液混匀。
9.  30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。
性能：
1. 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数R值，大于等于0.9900。
2. 灵敏度：检测浓度小于0.1 U/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏：2-8℃，避光防潮保存。
6. 有效期：6个月
 

 
使用方法：
测定法的灵敏度来自作为报告的酶。众所周知，酶是一种有机催化剂，很少量的酶即可诱导大量的催化反应，产生可供观察的显色反应现象。因此该体系常被称为酶放大体系。
1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。   24μg/ml    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液
 12μg/ml    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液
 6μg/ml     3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液
 3μg/ml     2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液
 1.5μg/ml   1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液
2. 加样：分别设空白孔、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。|
3. 温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。   
4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。
成纤维细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)穗花杉双黄酮（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Amentoflavone
NAMALWA细胞，人Butt`s瘤细胞 小鼠肾癌细胞株,RuCa细胞 人间充质干细胞-肝脏裂解物HMSC-hp L梭砂贝母碱（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Hupehenine
NCI-H520(人肺鳞癌细胞) 5×106cells/瓶×2特女贞苷（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Specnuezhenide
CHO(仓鼠卵巢细胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0118HT-29(人结肠癌细胞)5×106cells/瓶×2 小鼠诱导性多潜能干细胞;PUMC-mips-D3天麻素(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Gastrodin
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);CHO-DUKXB11-prepro-TGFβ1 cDNA酸浆苦味素L（标准品）质量规格：供鉴别用Physalin L
DU 145(人前列腺癌细胞) 5×106cells/瓶×24-本酚，英文名或英文缩写：4-Iodopxenol，级别：AR，99.5%，规格：5克
CA12 Others Mouse 小鼠 Ca12 / Car12 人细胞裂解液 (阳性对照) 啉 Morpholine,≥99.0%  100ML 通用试剂
人脑瘤细胞;SF17L-环务基甘安醋 L-CYCLOPqNTYL GLYCINq 21-84-8
人脐带间叶干细胞(脐带)(HUMSC) (5×105)本酚红钠盐100克
CM-R008大鼠支气管成纤维细胞完全培养基100mL83-46-5β-谷甾醇(含菜油甾醇)beta-Sitosterol
AIMP1 Protein Mouse 重组小鼠 AIMP1 / EMAP2 / SCYE1 蛋白本甲酰三扶shēng huà shì jì容量：RT1克
小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)(5×105) U266B1 [U266], 人多发性骨髓瘤细胞 Human井冈霉素 Validamycin 37248-47-8 5G 通用试剂
大鼠背脊髓神经元RN-dsc轻拂醋;拂轻醋 xy7nofluoric ccid
CD1B & B2M Others Human 人 CD1B & B2M Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) Tyrosinedecarboxylase酪酸脱羧酶25克BR，2500～7000u/mg，猪血
猕猴肌肉细胞;MMm7109-72-8丁基n-Butyllitxium
人α1抗胰蛋白酶ELISA检测试剂盒说明书BPIFA2 Others Human 人 BPIFA2 / C20orf70 人细胞裂解液 (阳性对照) 物质P（1-9）Substance P (1-9)质量规格：>95%,BR
人食管上皮细胞完全培养基 100mL物质P（7-11）Substance P (7-11)质量规格：>95%,BR
7WML6.0细胞，人APP-PS1(M146L)双基因转染CHO细胞株 生孢梭菌 狗肺成纤维样细胞;DogL1TA-0910，他替瑞林TA-0910, taltirelin质量规格：>95%,BR
PPBP Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 NAP-2 / PPBP / CXCL7 蛋白 (Fc 标签)促甲状腺激素释放激素，游离酸TRH, Free Acid质量规格：>95%,BR
NRK-52E(大鼠肾小管导管上皮细胞) 5×106cells/瓶×2 人 APCDD1 人细胞裂解液 (阳性对照) 尿皮质激素Ⅲ，小鼠Urocortin III, mouse质量规格：>95%,BR
操作流程：
（1）待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。 
（2）酶标板置4℃，包被过夜。
（3）洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去），之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
（4）阴性对照孔每孔加入PBS 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。 
（5）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（6）洗板，同（4）。 
（7）每孔加1:5000稀释的HRP-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
（8）酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。 
（9）洗板，同（4）。 
（10）每孔加TMB显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。 
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4终止反应。 
（12）分别测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2，最终测得的OD值为两者之差（W1-W2），以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
（13）数据处理：在得出标本（S）和阴性对照（N）的 OD值后，计算S/N值。S/N≥2.1为阳性判定标准。产品仅用于科研