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库存 :9999
英文名 :Nucleic acid Freed,extraction-free NF-2
CAS号 :免提核酸释放剂NF-2/NF-3/NF-4
保质期 :2年
供应商 :Braveds
保存条件 :常温
规格 :300次
适用范围NF-2/NF-3/NF-4可直接裂解释放样品核酸(DNA/RNA),无需核酸抽提,直接取混合液上清作为模板进行核酸PCR扩增或恒温扩增,且缓冲液对核酸扩增的酶有特异性保护。
NF-2适用于所有临床样品(唾液、新鲜全血、血清、肺泡冲洗液、尿液、组织、环境)中细胞(真核、昆虫等)和病原体(病毒、支原体、衣原体、细菌等)采集后的高效灭活,含病原体的液体样品加入缓冲液后5min即可灭活裂解病原体,并高效释放出核酸。
混合液无需再抽提核酸,可直接取上清作为模板进行PCR或者恒温扩增检测。NF-2对核酸扩增酶(Taq酶、反转录酶、Bst酶、RPA酶等)无任何抑制,不影响扩增效率。
液体样本加入NF-2后,裂解出的核酸可在常温(22~25℃)保持稳定不降解,DNA可保持6个月;RNA可保持稳定性10天,4℃可保存个6个月,-80℃可保存1年。
释放步骤
1 血清、唾液、痰液、尿液、拭子采集液、细胞培养液等液体样本
- 取NF-2 150μL置于1.5mL离心管内,再取液体待检样本50μL,充分反复吹打混匀2-5次,室温(22~25℃)垂直放置静止≥2min即可。
- 如果是新鲜全血,则取10μL全血,加入100μL NF-2液中,充分反复吹打混匀2-5次,室温(22~25℃)垂直放置静止≥2min即可。
2 组织固体样本
取NF-2 300μL置于1.5mL离心管内,再取黄豆至花生粒大小的组织样品加入缓冲液中,用剪刀充分剪碎,充分反复吹打混匀3-5次,室温(22~25℃)垂直放置静止作用≥5min。5min后,取混合液上清2.5μL作为核酸扩增模板,进行实时荧光或常规PCR扩增,或者恒温扩增(LAMP、RPA、RCA等)。
注意:亦可加入生理盐水组织匀浆后取上清液,按照液体样本进行操作。
释放剂NF-2通用型扩增取样
直接取混合液上清2.5μL作为核酸扩增模板,进行实时荧光或常规PCR扩增,或者恒温扩增(LAMP、RPA、RCA等)。注意:模板的体积应≤核酸反应总体积的10%。即25μL的反应体系加入的混合上清不超过2.5μL,50μL的反应体系加入的混合上清不超过5μL。
注意:不要为提高灵敏度,加大模板的上样量,上样量过大反而抑制反应,影响灵敏度,甚至扩增不出来。
释放剂NF-3/NF-4冻干型扩增取样
直接取采样管上清25~50μL作为冻干型RPA、PCR或LAMP扩增模板,进行RPA、PCR或LAMP检测。
注意:取模板的体积应为冻干体系所需要的总体积,即25μL的冻干反应体系加入采样管上清为23μL,50μL的冻干反应体系加入的采样管上清为45μL(刚好一滴)。
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