油菜内标准cruciferin基因探针法PCR试剂盒

保存条件 ：低温冷藏

保质期 ：详见说明书

库存 ：100

供应商 ：上海莼试

规格 ：50T

油菜内标准cruciferin基因探针法PCR试剂盒产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
产品特点：
本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏 PCR检测试剂盒 。

V-ATPase A1    氢离子转运ATP合成酶A1抗体
VASP    血管扩张刺激磷蛋白抗体
Phospho-VASP    磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体
phospho-VEGFR2     磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体
phospho-VEGF receptor 2     磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体
phospho-VEGF receptor 2     磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体
VCAM-1    血管内皮细胞粘附分子抗体
Valine    缬氨酸抗体
VAP1    血管粘附蛋白1抗体
Vinexin    细胞间粘附蛋白Vinexin抗体
Vimentin    波形蛋白抗体
Vitamin A    维生素A抗体
Versican    蛋白聚糖Versican抗体
VWCE    VWCE抗体
VAX1    视神经视网膜相关蛋白VAX1抗体
VAX2    视神经视网膜相关蛋白VAX2抗体
Vitamin D Receptor/VDR    维生素D3受体抗体
VPREB1    B淋巴细胞前体蛋白1抗体
VCAM-1    血管内皮细胞粘附分子抗体
VNN2    血管非炎性蛋白2抗体
VHLH    脑视网膜血管瘤G7蛋白抗体
VGLUT1/BNP1    脑特异性钠依赖无机磷转运蛋白抗体
VMAT2    脑单胺类神经递质转运蛋白抗体
VHL    脑视网膜血管瘤G7蛋白抗体
油菜内标准cruciferin基因探针法PCR试剂盒VANGL2    神经管畸形相关蛋白VANGL2抗体
Phospho-VASP    磷酸化血管扩张刺激磷蛋白抗体
phospho-VEGF receptor 2     磷酸化血管内皮生长因子受体2抗体
V.cholera Ogawa    01群小川型霍乱弧菌抗体
VAMP-1+2+3    囊泡相关膜蛋白1,2,3抗体
VGF/NERP2    神经内分泌调节肽VGF抗体
VP2    重组猪细小病毒VP2蛋白抗体
VEGF-D    血管内皮生长因子D型抗体
VDCC-L alpha    L-型电压依赖型钙通道α抗体
phospho-VAV3    磷酸化鸟嘌呤核苷酸交换因子VAV3抗体
VAPA    囊泡相关膜蛋白相关蛋白A抗体
VAV2    癌基因VAV2抗体
VAPB    囊泡相关膜蛋白相关的蛋白B
VLDL Receptor    极低密度脂蛋白受体抗体
VILIP1    神经视锥蛋白样1抗体
VGLL2    转录辅助因子退变样蛋白2抗体
VGLL4    转录辅助因子退变样蛋白4抗体
VHR    丝氨酸/苏氨酸特定蛋白磷酸酶抗体
VG5Q    血管生长因子VG5Q抗体
VE Cadherin    上皮型钙粘附分子抗体
VAT1L    囊泡胺转运蛋白1家族蛋白抗体
VPS4a    液泡分选蛋白4抗体
VDAC3    线粒体外膜孔蛋白3抗体
Visual Arrestin    视觉抑制蛋白抗体
VEGFR3    血管内皮细胞生长因子受体3抗体
VAT    囊泡乙酰胆碱通道抗体
产品特点：
1. 使用化学修饰的热启动聚合酶，反应特异性高，*程度地避免了非特异扩增；
2. 反应缓冲液经充分优化，反应灵敏快速，40个循环只需20多分钟；
3. 抗干扰能力强，反应重复性高，适合对土壤、粪便、肿瘤和血液来源的复杂样本中的靶基因进行检测分析。 在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，zui后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
 特异性荧光标记：
 TaqMan法
 TaqMan探针的特性：
（1）5′端标记有报告基团（Reporter, R），如FAM、VIC等
（2）3′端标记有荧光淬灭基团 （Quencher, Q）
（3）探针完整，R所发射的荧光能量被Q基团吸收 ，无荧光， R与Q分开，发荧光
（4）Taq酶有 5′→3′外切核酸酶活性，可水解探针 相对定量通过内标定量：
内标（Endogenous Control）通常是β-actin、GAPDH基因等看家基因，在细胞中的表达量或在基因组中定，受环境因素影响小，内标定量结果代表了样本中所含细胞或基因组数量。
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表： 试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量 荧光PCR反应液 14µL N×14µL 酶混合物 1 µL N×1 µL 总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。

实验方法步骤：
方法

1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。      10×PCR buffer 
                  5 μl     dNTP mix （2mM）   
          4 μl     引物1（10pM） 
                2 μl     引物2（10pM） 
                2 μl     Taq酶 （2U/μl）
                1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）
   1 μl      加ddH2O至 50 μl 
  视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl氯仿进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
PCR实验步骤
典型的PCR由（1）高温变性模板；（2）引物与模板退火；（3）引物沿模板延伸三步反应组成一个循环，通过多次循环反应，使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是：
将待扩增的模板DNA置高温下（通常为93℃-94℃）使其变性解成单链；
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合，两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短；
耐热的DNA聚合酶（Taq酶）在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入，以目的基因为模板从5’→3’方向延伸，合成DNA的新互补链。