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文献和实验
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库存 :100
供应商 :上海一研
检测限 :0.312-20 ng/mL
检测方法 :ELISA Kit
应用 :ELISA Kit
适应物种 :详见说明书
标记物 :详见说明书
样本 :Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit ELISA Kit
规格 :48T/96T
Nuclear factor NF-kappa-B p105 subunit ELISA Kit需要而未提供的试剂和器材1. 酶标仪(450nm)
2. 高精度加样器及枪头:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
sFASL(Human soluble Factor-related Apoptosis ligand) ELISA Kit 人可溶性凋亡相关因子配体 96T
Plant Vitamin B6,VB6 ELISA Kit 植物维生素B6 96T
MMP-1 (Rabbit matrix metalloproteinase 1) ELISA Kit 兔基质金属蛋白酶1 96T
BMP-2(Mouse Bone morphogenetic protein 2) ELISA Kit 小鼠骨成型蛋白2 96T
HSP47 ELISA Kit 大鼠热休克蛋白47 96T
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GC ELISA Kit 大鼠内源性糖皮质激素 96T
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CS ELISA Kit 大鼠柠檬酸合酶 96T
PF-4/CXCL4 (Rabbit Platelet Factor 4) ELISA Kit 兔子血小板因子4 96T
IGFBP-6(Mouse Insulin-like growth factor binding protein 6) ELISA kit 小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白6 96T
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CSF(Human colony-stimulating factor) ELISA Kit 人集落刺激因子 96T
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CDl4(Human cluster Of differentiation) ELISA Kit
样本处理及要求
1. 血清:将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20 分钟,取上清即可,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
2. 血浆:用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本,并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆:用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织,去除残留血液(匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果),称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS(一般按1:9的重量体积比,比如1g的组织样品对应9mL的PBS,具体体积可根据实验需要适当调整,并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂)加入玻璃匀浆器中,于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞,可以对匀浆液进行超声破碎,或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟,取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本:请1000×g离心20分钟,取上清即可检测,或将上清置于-20℃或-80℃保存,但应避免反复冻融。
实验材料与试剂配制:
1. 仪器与材料:酶标仪(使用前预热30分钟),微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水,滤纸。
2. 缓冲液使用:加5ul 的缓冲液于50ul 的样品中,如果样品量不够或者不确定,缓冲液和样品的混合比例不要小于1:10即可。
混匀,静置1小时备用(如果标本是血清或者血浆,此步骤忽略)。
3. 洗液的配制:按1:100的比例配制洗液备用。
操作步骤:
1. 取出试剂盒,室温(20-25℃)放置 30 分钟。 2. 分组:取出 96 孔板,根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数,把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组(6 个浓度)、空白孔、待测样品组。
注:为减少实验误差,保证准确性,建议设置复孔。
3. 加样:依照标准品的顺序分别加入 50ul 的标准品溶液于空白微孔中;空白对照孔加入 50ul 的蒸馏水;其余微孔中加入 50ul的待测样本。
4. 加酶标溶液:标准品组、待测样本组各孔中加入 100ul 的酶标溶液(空白对照孔除外)。
5. 温育:酶标板用封板纸密封后,放入湿盒内于 37℃恒温孵育 1 小时。
6. 洗板:用稀释后的洗涤液注满每孔,静置 15-30s,充分清洗酶标板 5 次,用吸水纸彻底拍干。 7. 显色:各孔加入显色剂 A 液 50ul 后,再加入显色剂 B 液 50ul。
8. 终止:25-37℃下避光反应 10-15 分钟,加入 50ul 终止液。
9. 读板:在 450nm 波长读取各孔的 OD 值。
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