产品详情
文献和实验
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库存 :大量
英文名 :Toxophasma gondii
保质期 :一年
供应商 :上海康朗生物科技有限公司
保存条件 :负20度
规格 :50次
刚地弓形虫PCR试剂盒
Toxophasma gondii
产品及特点
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可感染包括人在内所有温血动物 的细胞内寄生原虫,对人畜的危害很大,孕妇感染弓形虫后导致早产、流产、胎 儿发育畸形,是当今致畸胎的四大原因之一,也是免疫功能低下患者死亡的主要 原因(如 AIDS 病人等)。传统的显微镜病原体检查方法,检出率低;以抗体检 测为主的血清学诊断方法不能准确反映弓形虫现时感染情况。PCR 检测技术的发 展为解决这些问题提供了更灵敏的方法。本产品就是以 PCR 技术为基础开发的 专门检测刚地弓形虫的试剂盒,它具有下列特点:
1. 即开即用,用户只需要提供样品 DNA。
2. 引物经过优化,灵敏性高。 3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. 特异性高,引物是根据岗地弓形虫高度保守的、长为 529 bp 的重复序列设 计。
5. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
6. 本产品足够 50 次 40uL 体系的常规 PCR。
7. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
刚地弓形虫PCR试剂盒规格及成分
编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
PCR MagicMix 3.0(含染料) |
1 mL(亮黄盖) |
试剂二 |
刚地弓形虫 PCR 引物对 |
100 uL(本色盖) |
试剂三 |
弓形虫基因阳性对照 |
50 uL(白盖) |
试剂四 |
超纯水 |
1 mL(蓝盖)
|
试剂五 | 天净沙核酸释放剂试用装 | 20 次(1mL,绿盖) |
试剂六 |
使用手册 |
1 份 |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳 性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此 作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。
二、阳性对照
3、为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体细菌做阳性对 照,只提供没有传染性的、可以直接使用的 DNA 段作为阳性对照。
4、用本试剂盒的阳性对照原液稀释制备阳性对照工作液时,由于阳性对照原液 浓度非常高,一定要注意不要污染本试剂盒的其他试剂和成分。
三、设置 PCR 反应(40uL 体系)
5、对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对 照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
N+2个 样品管 |
PCR阴性对照 |
PCR阳性对照 |
刚地弓形虫 PCR 引物对 |
各2 μL |
2 μL |
2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 | 各 5 uL | ||
超纯水 |
各 13 uL |
16 uL |
18uL |
弓形虫基因阳性对照的 10000 倍稀释液 |
- |
|
2 uL |
PCR MagicMix 3.0 | 各 20 uL | 20 uL | 20 uL |
四、PCR 反应参数
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
94℃ |
5 min |
PCR反应 (35个循环) |
94℃ |
50 sec |
58℃ |
60 sec |
|
72℃ |
60 sec |
|
最后延伸 |
72℃ |
10 min |
五、电泳检测
6、取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。预期的 PCR 产 物长度为 212bp。阳性对照必须有此条带出现,阴性对照必须无任何扩增, 否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以 排除 PCR 抑制剂的感染。
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
上海康朗生物科技有限公司
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