产品详情
文献和实验
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库存 :大量
英文名 :Mouse Hepatitis Virus(MHV)
保质期 :一年
供应商 :上海康朗生物科技有限公司
保存条件 :负20度
规格 :50次
小鼠肝炎病毒RT-PCR试剂盒
Mouse Hepatitis Virus(MHV)
产品及特点
小鼠肝炎病毒(Mouse Hepatitis Virus,MHV)会引起小鼠肝炎,但在正常情 况下大多呈不显性感染,只在应激因素激发下才能成为致死性疾病,主要为肝炎 和脑炎。老龄小鼠感染后会出现腹水,乳鼠,或在球状附红细胞体参与下感染的 成年小鼠,肝呈黄色或褐色,并有出血斑点;肾肿胀而苍白。小鼠肝炎病毒,无 论在体内外,均易建立持续感染,带毒小鼠分布于全世界,感染范围广,影响力 大,因此快速灵敏诊断具有重要意义。为此本公司开发了本产品,可用于在科研 领域快速定量检测小鼠肝炎病毒。它具有下列特点。它具有下列特点:
1. 一站式,用于不需要单独准备每种成分,包括引物和对照。
2. 根据小鼠肝炎病毒的保守基因序列设计的引物,具有良好的特异性。
3. 灵敏度可以达到 1000 拷贝/反应。
4. 使用一管式 RT-PCR 技术,RT 和 PCR 两步在一个试管内完成,不需要中间 转移样品,降低了操作误差和可能的污染。
5. 本产品足够 50 次 20μL 体系的 RT-PCR。
6. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
小鼠肝炎病毒RT-PCR试剂盒规格及成分
编号 | 成 份 |
规格 |
试剂一 | 5×双酶一管式 RT-PCR Buffer |
200 μL(橘黄盖) |
试剂二 | MMLV-Taq Mix |
75 μL(红盖) |
试剂三 | 超纯水 |
1 mL(亮黄盖) |
试剂四 | 小鼠肝炎病毒 RT-PCR 引物 混合液 |
100 μL(白盖) |
试剂五 | 小鼠肝炎病毒 RT-PCR 阳性 对照(1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL(黄盖) |
试剂六 | 天净沙核酸释放剂(试用装) | 20 次(1mL,绿盖) |
试剂七 | 使用手册 |
1 份) |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为 12 个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分 分开放置,因为其容易污染其他成分,造成假阳性。
自备试剂 样品 RNA
使用方法 一、样品 RNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳性 对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 流行性出血热病毒 PCR 阳性对照的 100 倍稀释作为制备的阳性对照;用水作为制备的阴性对照。 制备所得成为样品 RNA。
2. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 RNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒 RNA 提 取试剂盒兼容。
二、设置 RT-PCR 反应(20μL 体系)
3. 如果有 N+2 个样品,则标记 N+4 个 PCR 管(额外增加的两个管一个是 RT-PCR 阳性对照,另一个是 RT-PCR 阴性对照)并按照下表在 PCR 管中 加入下列成分:
成分 |
样品 |
阳性对照 |
阴性对照 |
5×双酶一管式 RT-PCR Buffer |
各 4 μL |
4 μL |
4 μL |
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 引物混合液 |
各2μL |
2μL |
2μL |
N+2 个制备的 RNA 样品 |
各12.5 μL |
|
|
超纯水 |
|
12.5 μL |
|
小鼠肝炎病毒 RT-PCR 阳性对照 的 100 倍稀释液 |
L |
|
12.5 μL |
MMLV-Taq Mix | 1.5 μL | 1.5 μL | 1.5 μL |
4. 上机进行 RT-PCR,RT-PCR 反应参数为:
过程 |
温度 |
时间 |
逆转录 |
42℃ |
30 min |
预变性 |
95℃ |
5 min |
PCR 反应 (35 个循环) |
95℃ |
30 sec |
55℃ |
30 sec |
|
延伸 | 72℃ | 60 sec |
5. 琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物, 则说明实验失败,需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、 阳性对照有 122bp 预期的扩增产物的情况下,才有必要分析样品的实验结果, 如果有扩增产物则为阳性,如果无则为阴性。
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
上海康朗生物科技有限公司
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