产品详情
文献和实验
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库存 :大量
英文名 :Haemophilus parasuis
保质期 :一年
供应商 :上海康朗生物科技有限公司
保存条件 :负20度
规格 :50次
副猪嗜血杆菌PCR试剂盒
Group B Streptococcus spp.(GBS)
产品及特点
副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPS)属巴斯德氏菌科嗜血杆菌 属,是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)且没有运动性的小型、多形性、 革兰氏阴性杆菌。HPS 可引起猪多发性浆膜炎、关节炎,严重时导致体温升 高、呼吸困难甚至死亡,给养猪业带来巨大的经济损失。目前对 HPS 的诊断 主要是细菌分离培养和 PCR。HPS 培养需要 NAD、马血清和 5%CO2 环境, 需 24-36 小时,还容易出现杂菌污染,因此 PCR 是目前诊断 HPS 常用的 方法。本产品是根据 PCR 原理开发的副猪嗜血杆菌检测试剂盒,它具有下列 特点:
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩副猪嗜血杆菌,与其他病原没有交叉 反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
副猪嗜血杆菌PCR试剂盒规格及成分
编号 |
成分 |
规格 |
试剂一 |
PCR MagicMix 3. |
1 mL(红盖) |
试剂二 |
超纯水 |
1 mL(亮黄v) |
试剂三 |
副猪嗜血杆菌 PCR 引物混合液 |
100 μL(白盖) |
试剂四 |
副猪嗜血杆菌 PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
50 μL(黄盖))
|
试剂五 |
使用手册 |
1 份 |
运输及保存 低温运输,-20℃保存,保存期限为一年。阳性对照需要单独放置,不要污染其 他试剂。
自备试剂 样品 DNA。
使用方法 一、样品 DNA 的制备
1. 如果有 N 个样品,必须设置 N+2 个提取,多出的一个是 PC(样品制备阳 性对照),一个是 NC(样品制备阴性对照)。可以用 10μL 阳性对照的 1 千倍稀释液再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此 作为 PC。另外用水作为 NC。
2. 用自选方法纯化样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数寄生虫 DNA 提取 试剂盒兼容。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性 对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 |
N+2个 样品管 |
PCR阴性对照 |
PCR阳性对照 |
PCR MagicMix 3.0 |
各20 μL |
20 μL |
20 μL |
副猪嗜血杆菌 PCR引物混合液 |
各2 μL |
2 μL |
2 μL |
N+2个样品DNA模板 |
各18 μL |
- |
- |
PCR 阴性对照(水) |
- |
18 μL |
- |
PCR 阳性对照(副猪嗜血 杆菌 PCR 阳性对照的 10000 倍稀释液) |
- |
- |
18 μL |
4. 按下表设置 PCR 反应:
过程 |
温度 |
时间 |
预变性 |
95℃ |
5 min |
PCR反应 (35个循环) |
95℃ |
30 sec |
55℃ |
30 sec |
|
72℃ |
30 sec |
|
最后延伸 |
72℃ |
7 min |
三、电泳检测
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix 在 扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳 性对照必须有 551bp 大小的条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实 验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
本试剂盒适用于各种 RNA制品的反转录反应以及随后的PCR扩增。它采用AMV进行反转录反应,能够获得更长的反转录产物。同时,在20ul反转录体系和50ul PCR反应体系中,还可以一次性得到足够量的PCR产物用于后续的克隆实验。本试剂盒中配置的酶均为进口的酶。RT酶采用进口的AMV,所以cDNA更长,基因的信息保留得更完整!反转录过程中特异的RNase抑制剂可有效降低由于外源RNase污染而导致实验失败的风险。本试剂盒使用方便、快捷,可广泛用于cDNA克隆及目的基因检测等分子生物学实验。
注意:
1. 本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床诊断或治疗,食品及化妆品等用途。请勿存放于普通住宅区。
2. 为了您的安全和健康,请穿好实验服并佩戴一次性手套和口罩操作。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
上海康朗生物科技有限公司
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