研选Trelief® 5α Chemically Competent Cell/感受态系列/擎科生物TSINGKE

【产品简介】

Trelief^®5α是转化效率大于10¹⁰cfu/ug的化学感受态细胞，采用大肠杆菌DH5α的突变株，结合本公司独创的超高效感受态制备缓冲液及特殊的制备工艺，转化效率达到电转化感受态细胞同一级别，对>15 kb质粒的转化效率亦无明显降低，最高可转化50 kb大小的质粒。本产品对四环素不敏感，可转化除四环素外的大部分抗性质粒。本产品兼容Amp抗性质粒的10 min快速转化流程及Kana抗性质粒的30 min快速转化流程，可用于常规的克隆、蓝白斑筛选、珍贵核酸样品的转化，DNA/cDNA文库构建等实验。使用pUC19质粒DNA检测，转化效率高达1.5×10¹⁰ cfu/μg。

【产品特点】
质粒DNA的产量大和质量高
重组酶缺陷型
具有T1，T5噬菌体抗性
8小时快速生长
转化效率可达1.5×10¹⁰ cfu/μg
超高兼容性
可⽤于蓝⽩斑筛选实验

【基因型】
F^-φ80(lacZ)ΔM15Δ (lacZYA-argF) U169 deoR endA1 recA1 hsdR17 (rk^- , mk⁺) supE44λ-thi-1gyrA96 relA1 phoA

【产品组成及保存】
 -83~-75℃保存6个月

【操作流程】
加入目的 DNA（质粒或连接产物），轻轻混匀后进行如下步骤：
1. 快速转化
Amp抗性质粒转化（10 min）

Kan抗性质粒转化（30 min）

2. 常规转化（1 h 33 min）

【注意事项】
感受态细胞在冰上融化；
实验操作轻柔;·请勿反复冻融;
目的质粒或连接产物不能超过感受态总体积的1/10；
珍贵核酸样品的转化请务必使用常规转化流程。

【常见问题】
Q1.转化后不长菌或菌落极少?
1） 检查上游构建是否有问题∶查看样品浓度，连接比例、温度、时间是否合适，建议做一个构建阳性对照。
2）检查感受态细胞是否失效∶设置一组质粒转化阳性对照验证感受态效率，建议每次使用妥善冻存的感受态细胞，感受态勿反复冻融。
3） 平板是否有问题∶抗生素种类是否正确、添加是否过量，建议重新配制平板。

Q2. 转化后平板上无单克隆，出现类似白色浆状物菌膜?
1）抗生素无效或浓度过低，操作中引入杂菌∶重新转化质粒，更换抗生素。
2）涂布后，平板未晾干。
3）转化时，质粒添加过量。

Q3. 生长速度慢，菌落小?
1）复苏时间过短∶延长复苏时间，提高菌落在平板上的生长速度。
2）培养基或基因质量∶若生长时间超过18小时菌落仍然很小，可能是培养基质量低下或者基因本身存在毒性抑制细菌生长，建议更换高质量培养基。

Q4. 长杂菌或微卫星菌落?
1）抗生素失效或有效浓度下降∶配制平板时培养基温度过高、平板配制时间过长、抗生素母液配制时间过长、使用了劣质抗生素，建议重新配制平板或更换高质量抗生素。
2） 污染相同抗性菌落∶更换所用试剂、耗材，无菌操作。推荐做转化实验之前，使用擎科核酸清洁液（目录号∶TSP001）喷洒实验台、实验仪器、用具，消除污染。