Trelief® SoSoo Cloning Kit Ver.2/克隆系列/无缝克隆技术，微量连接/擎科生物TSINGKE

保存条件 ：-25 ℃ ~-15℃保存1年.

英文名 ：Trelief® SoSoo Cloning Kit Ver.2

库存 ：充足

供应商 ：北京擎科生物科技股份有限公司

规格 ：20次

【产品简介】
SoSoo重组克隆试剂盒利用同源重组的原理，可快速将1~5个片段定向克降到任意方式线性化的载体中。本试剂盒含有的2×SoSoo Mix Ver.2可将单个或多个片段定向重组至载体中，克服了酶切位点的限制，突破了低浓度、高GC和长片段等克隆效率低的难点，产物可直接转化感受态细胞。重组反应可在恒温条件下快速进行（50℃C处理15 min），数小时内即可完成从DNA样品准备到重组产物的转化涂板培养的全部操作。

【产品特点】
快速：反应仅需15 min；
简单：不受片段酶切位点影响，无需对片段进行酶切；
高效：阳性率可达95%以上；
无缝：不引入额外序列。

【产品应用】
无缝克隆；
定点突变；
高通量克隆。

【产品组成及保存】
-25 ℃ ~-15℃保存1年，避免反复冻融。

组分	规格（20 次）
2×SoSoo Mix	100 µL
Control Template(5 ng/µL)*	10 µL
Control Vector(10 ng/µL)**	10 µL

*线性化质粒，抗性为Amp，含M13F/R序列。
​*阳性对照片段，大小为1,000 bp。
  
【注意事项】
重叠区域的Tm值尽量一致且>60℃。
线性化载体和片段PCR产物必须凝胶纯化，常用的分光光度法极易受DNA纯度、DNA稀释液pH等因素影响，测定值和DNA实际浓度往往偏差较大，推荐纯化后通过琼脂糖凝胶电泳检测其质量和浓度。
控制好载体和片段的用量及摩尔比，线性化载体用量在10~100 ng之间，载体和插入片段摩尔比1∶2~1∶10均可，多片段连接时各片段摩尔比为1∶1。
加样完成后，吹打混匀，低速瞬时离心使所有溶液至离心管底部，重组产物即连即转。
建议每次实验，做阳性片段和阳性质粒的对照。

【操作流程】
按照如下体系配制反应液，混匀瞬时离心后上机。50℃，15 min。

组分	体积
2×SoSoo Mix	5 µL
插入片段 1	X1 µL*
......	......
插入片段 n	Xn µL
线性载体	Y µL*
ddH2O	Up to 10 µL

*载体与插入片段的摩尔比为1：2~1：10。多片段连接时各片段之间摩尔比为1：1。
pmols=（质量ng×1000）/（片段长度 bp×650 daltons）。
公式简化后V载体：V片段=摩尔比×（B载体C片段 /B片段C载体）
例如：
5 kb线性化载体（20 ng/ µL）与2 kb的插入片段（100 ng/ µL）以摩尔比1：5连接。
载体和片段的体积比计算为：
即V载体：V片段=1/5 ×(5 ×100/2×20)=2.5，所以反应体系为

组分	体积
2×SoSoo Mix Plus	5 µL
插入片段	1.4 µL
线性载体	3.6 µL
ddH2O	Up to 10 µL

【问题讨论】
Q1.不长菌落或菌落极少?
1）感受态效率低
使用新制备或妥善冻存的感受态细胞，确保转化效率>10⁷cfu/ ug。每次可设置一组转化质粒的对照实验，以检测感受态细胞的转化效率。
2）线性化克隆载体和插入片段扩增产物的使用量不足或过量，或者比例不佳。
3）PCR产物未纯化或紫外照射时间过长在365nm长波紫外下切胶纯化，短波紫外会损伤DNA。
4）线性载体和插入片段不纯，抑制反应
实验证明连接体系中FDTA，胍盐等会显著降低重组效率，可再次纯化去除盐分的干扰。DNA纯化产物推荐溶解保存在pH8.0的ddH₂O中。
5）平板抗生素使用错误或浓度过高核查平板抗性以及浓度是否正确。

【实例分享】
使用Trelief^® SoSoo Cloning Kit Ver.2，将5个长度为500 bp的目的片段插入载体pcDNA3.1（+）中。结果显示插入成功率均为7/7。


本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用,不可用于临床诊断或治疗。