研选pClone007 Blunt Simple Vector Kit/克隆系列/1分钟快速连接，平末端的PCR产物适用，无多克隆位点/擎科生物TSINGKE

保存条件 ：  -25~-15℃保存1年，18个月内不影响使用。

英文名 ：pClone007 Blunt Simple Vector Kit

库存 ：充足

供应商 ：北京擎科生物科技股份有限公司

规格 ：20次

【产品简介】 
本产品利用拓扑异构酶Ⅰ（Vaccinia topoisomerase Ⅰ ）瞬间完成连接反应的优良特性，结合本公司独特的载体制备工艺，完美解决传统TA克隆的各种缺陷，实现克隆技术的革命飞跃。 【产品特点】
5分钟快速连接
低背景，阳性率可达95%；
无多克隆位点，连接300 bp以下的小片段可避免测序中断；
无需蓝白斑筛选。

【产品应用】
本产品适用于≤5,000 bp目的片段的平末端克隆。

【产品组成及保存】
   -25~-15℃保存1年。

组分	规格（20 次）
pClone007 Blunt Simple Vector(15 ng/μL)	20 µL
10×Topo Mix	20 µL
Super PCR Mix（Green）*	500 µL
Control Template（50 ng/µL）**	10 µL
pUC19（10 pg/µL）***	10 µL

*菌落及菌液鉴定PCR试剂，浓度为1×，为PCR与载体通用引物M13F-47，M13R-48的混合物
**阳性对照片段，用于检测目的产物的质量，大小为1 kb。
***阳性对照质粒，用于检测感受态细胞的质量，为Amp抗性

【操作流程】

插入片段大小 bp	最佳用量 ng
300~1000	10~50
1000~2000	50~100
2000~5000	100~200

【问题讨论】
Q1.克隆数少或者不长克隆?
1）连接体系放冰上或冰箱中，加入感受态时没有立即混匀
低温会显著降低 Topo 酶连接效率，连接反应结束后及时转化，不能置于冰上或冰箱中；加入感受态时迅速吹打搅拌混匀，以上两点操作可以有效提高克隆数。
2）感受态效率低
推荐Trelief^TM5αChemically Competent Cell（目录号∶TSC-CO1），转化效率可达1.5×10¹⁰ cfu/μg。
自制钙转感受态与本产品兼容性不佳，转化效率仅10⁷cfu/g;感受态保存不当，如放置于-20℃或反复冻融会进一步降低转化效率。
3）感受态细胞中加入过多的连接产物
连接产物的体积不宜超过感受态细胞体积的1/10，否则会显著降低转化效率。
4）回收产物不纯
不推荐多管样品过一个柱子的方式回收DNA，会造成更多的EDTA、肌盐等杂质残留，抑制反应；胶回收产物请勿使用TE进行保存。
5）出现连接抑制效应
用于连接的DNA浓度太高时，会降低连接效率。请严格参照说明书确定DNA的加入量。
6） 反应体系未混匀
推荐将所有溶液直接加入管底后用移液器吸打混匀。低速离心或手甩的方式不足以混匀反应体系。

【实例分享】
使用007连接2 kb PCR扩增产物后转化Trelief ™ 5α Chemically Competent Cell。菌落PCR鉴定阳性率16/16，测序正确率100%。


本试剂产品仅供科学研究或进一步生产使用,不可用于临床诊断或治疗。