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慢病毒包装
慢病毒（Lentivirus）是逆转录病毒的一种，慢病毒载体是以HIV-1为基础发展起来的基因治疗载体，可将外源基因或外源干扰序列有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力，常用于感染难转染的细胞，如原代细胞、神经元细胞、干细胞、不分化细胞、肝细胞、内皮细胞、肿瘤细胞等，转染效率近100%，是介导外源基因表达的强大工具，可在体内和体外实现过表达、基因沉默、基因编辑等多种应用，让基因功能研究变得更加便利。
【产品类型】
根据客户提供的基因信息，设计并合成3条针对目的基因的shRNA模板，分别连接到慢病毒载体上，通过包装获得3个干扰目的基因的慢病毒株，以此达到确保至少1条能够达到有效干扰目的基因表达的目的。包装完成后提供全部3种干扰慢病毒。
（2）定制靶点干扰慢病毒
根据客户提供的基因信息和确定的干扰序列，设计和合成1条针对干扰序列的shRNA模板并将其连接到慢病毒载体上，通过包装获得目的基因的干扰慢病毒。
3. 敲除慢病毒
利用sgRNA识别靶基因序列，核酸内切酶Cas9切断靶基因后细胞会通过NHEJ机制在断裂处结合，结合过程中随机插入N碱基，若插入的N碱基数恰好不是3的倍数，则目的基因发生移码突变，实现基因敲除。与RNA 干扰相比不同之处在于，Cas9 是从基因组水平对基因进行敲除，让靶蛋白完全失活。
根据客户提供的基因信息，针对靶基因设计三个sgRNA，保证至少有一个可敲除成功，可选择Cas9和sgRNA是否在同一骨架上。
注：Cas9蛋白基因序列长达4 kb，为保证病毒滴度，建议选择Cas9和sgRNA分开包装。
表达时间长：慢病毒通过将外源基因整合到宿主细胞基因组上，可实现目的基因长时间稳定的表达，不随着细胞分裂传代而丢失，是细胞实验的优质选择。
安全性高：未发现致病性，已被用于CAR-T治疗作用于人体。
免疫原性低：直接注射活体组织不易造成免疫反应，适用于动物实验。
【常用载体】
| 慢病毒类型 | 常用载体 | 其他用途 |
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过表达慢病毒 |
pLVX-IRES-Zsgreen1Amp+ |
哺乳动物细胞表达载体/双顺反子载体/荧光报告载体 |
| pLVX-IRES-PuroAmp+ |
哺乳动物细胞表达载体 |
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| PLVX-puroAmp+ |
哺乳动物细胞慢病毒表达载体 |
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| PLVX-IRES-mcherryAmp+ |
哺乳动物细胞表达载体/双顺反子载体/荧光报告载体 |
|
| PCDH-CMV-MCS-EF1-copGFP-T2A-PuroAmp+ |
cDNA表达载体/双启动子载体 |
|
| PCDH-CMV-MCS-EF1-RFP-T2A-PuroAmp+ |
cDNA表达载体/双启动子载体 |
|
| pCDH-CMV-MCS-EF1-copGFPAmp+ |
/ |
|
|
干扰慢病毒 |
Plko.1-EGFP-PUROAmp+ |
shRNA表达载体 |
| PLVX-ShRNA1Amp+ |
shRNA表达载体 |
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| pLKO.1-puroAmp+ |
shRNA表达载体 |
|
| pLVX-shRNA2-Luc-Puro |
shRNA表达载体 |
【客户提供（订购表）】
2. 目的细胞：名称、培养条件;
3. 携带标签：如GFP/RFP/PURO等。
注：产品订购表请于【技术资料】处下载。
【擎科交付】
| 服务项目 |
交付 |
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过表达慢病毒 |
慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
| 对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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| 实验报告1份 |
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三保一干扰 |
不同位点干扰慢病毒各5支，共15支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
| 对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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| 实验报告1份 |
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定制靶点干扰 |
干扰慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
| 对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
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| 实验报告1份 |
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敲除慢病毒 |
不同位点敲除慢病毒各5支，共15支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
| 对照慢病毒5支，200 μL/支，(滴度≥1×108 TU/mL) |
|
| 实验报告1份 |
【注意事项】
2. 慢病毒稀释：我公司提供的慢病毒滴度均在1×108 TU/mL以上，当需要稀释慢病毒滴度时，请从-80℃冰箱取出适量病毒，置于4℃融化后，用无血清的细胞基础培养基或1×PBS（无Ca2+/Mg2+ ）稀释至合适滴度后进行细胞感染实验，稀释后的病毒4℃保存（请尽量在3天内用完)，不建议进行分装冻存。
3. 反复冻融会降低病毒滴度：每次冻融会降低病毒滴度10%~20%左右；因此在病毒使用过程中应尽量避免反复冻融，为避免反复冻融我们强烈建议客户收到病毒后按照每次的使用量进行分装。
4. 避免不利的环境因素对病毒活力的影响，包括不合适的pH值（合适pH值在7.2左右），较高的温度、有机溶剂、蛋白变性剂、表面活性剂、阳离子螯合剂如EDTA等。
5. 避免吹打或剧烈振荡病毒液，因产生气泡易使病毒侵染力下降。
6. 注意病毒液不能过0.22 µm滤膜，该处理会将导致滴度大幅下降。
【联系我们】
公司网址：www.tsingke.com.cn
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