D-荧光素钾盐发光底物 122799

库存 ：现货

英文名 ：D-Luciferin

供应商 ：PerkinElmer

保存条件 ：-20

规格 ：1g

小动物活体成像萤光素酶 D-荧光素钾盐发光底物

PerkinElmer订货号 122799 D-Luciferin 底物（货号:122799, 1克）

D-荧光素钾盐-小动物活体成像技术核心金标准试剂

D-荧光素是一种在生物细胞中发现的化学物质，可产生生物发光。当荧光素在萤火虫荧光素酶和ATP的催化作用下被氧化时，产生光。荧光素能够穿透细胞膜并且可以用于监测已被转导以表达荧光素酶的体内感兴趣细胞的活性。因为与荧光素酶的反应是ATP依赖性的，所以也可以确定细胞活性。
确定荧光素动力学曲线模型步骤

 

一、生成模型中荧光素酶活性的动力学曲线 

1.通过腹膜内（i.p.）途径用15mg / ml或30mg / ml的溶液将荧光素注射入动物体内， 溶于PBS，工作剂量为150 mg / kg。*
2.等待三分钟，用你选择的方法镇静动物;气体或注射麻醉。 （2％ 异氟醚气体麻醉可使健康动物在IVIS中安全镇静45分钟。）
3.将镇静的动物放入成像室并拍摄第一张图像，现在大约为5张 在Luciferin注射后几分钟。
4.每隔5-10分钟继续拍摄图像，最多约40分钟。这将表明动力学 模型中荧光素摄取的曲线。
5.一旦建立了曲线，就可以按照右侧的成像程序进行操作 此后成像的最佳时间点。 （Luciferin注射后10-20分钟对大多数人来说是理想的 楷模。）
6.每隔10分钟，最多40分钟，使用IVIS成像系统检查体外生物发光 确定动力学曲线并找出每种细胞类型的峰值成像时间点。

 

二、使用PerkinElmerIVIS®体内成像系统 

1.将荧光素注入动物体内。用15mg / ml或30mg / ml的溶液溶解在PBS中，进行加工剂量为150毫克/千克。*
2.根据动力学曲线确定允许在动物中分配最佳时间。
3.将鼠放入透明的有机玻璃麻醉盒（2.5-3.5％异氟醚）中，使视觉畅通无阻监测动物;例如人们可以很容易地确定动物是否在呼吸。 向盒子提供麻醉的管子被分开，以便麻醉的浓度相同输送到位于成像室内的麻醉歧管。
4.一旦麻醉完全发挥作用，将鼠从盒子转移到附着的鼻锥上成像室内的歧管。关上门然后点击Living中的“获取”按钮计算机屏幕上的图像程序。成像时间为每个位置1至5分钟（背/腹），取决于实验，每个位置的5分钟数是最大值。当将鼠从背部转向腹部（反之亦然）时，可以检查它是否有任何窘迫的迹象或生命力的变化。成像过程完成后，将鼠放回笼中，快速唤醒。
*注意：许多人喜欢注入清醒的动物。注射前镇静鼠是可以接受的，但是这样做可能会略微延长动力学（峰值荧光素酶表达时间）。
用于体外生物发光测定的荧光素的制备


实验材料准备
•D-Luciferin萤光素钾盐，1.0克/瓶（PerkinElmer订货＃122799）
•无菌水
•完整的媒介
应将细胞接种于平板中过夜或测定前数小时，以使细胞附着于细胞 底部。可以将悬浮细胞系接种在平板中的工作溶液中以进行直接培养成像。
如果倍增时间相对较短，则应考虑倍增时间进行细胞计数。
执行步骤
1.在无菌水中制备200X荧光素储备液（30 mg / ml）。注意：人们可以重建 将全部1.0克D-荧光素在33.3毫升无菌水中制成30毫克/毫升（200倍）的原液，或重建个体实验所需的D-荧光素的量。
2.通过倒置轻轻混合，直至荧光素完全溶解。*
3.在预热的组织培养基中制备150μg/ ml的D-荧光素工作溶液。 快速解冻200X荧光素的储备溶液，并在完全培养基中稀释1：200（最终150μg/ ml）浓度）。
4.从培养的细胞中吸出培养基。
5.在成像前将1x荧光素溶液加入细胞中。注意：将细胞在37°C下短时间孵育在成像之前可以增加信号。孵育时间取决于特定的细胞类型。一般来说孵育10分钟就足够了;根据需要进行测试和调整。
6.每隔10分钟，最多40分钟，使用IVIS成像系统检查体外生物发光确定动力学曲线并找出每种细胞类型的峰值成像时间点。