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文献和实验
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供应商 ：仕诺达生物
库存 ：999
样本 ：血清、血浆、组织匀浆
标记物 ：兔γ干扰素
适应物种 ：兔
应用 ：高校、中科院、研发中心
检测方法 ：双抗体一步夹心法酶联免疫
检测限 ： 1.0 pg/mL。
规格 ：48T/96T
兔（Rabbit）γ干扰素（IFN-γ）ELISA 检测试剂盒
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被γ干扰素
（IFN-γ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温
育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作
用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素（IFN-γ）呈正相关。用酶标
仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项
使用说明书
检测原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被γ干扰素
（IFN-γ）抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温
育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作
用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的γ干扰素（IFN-γ）呈正相关。用酶标
仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样品收集、处理及保存方法
- 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心 10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
- 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心 30 分钟取上清。
- 细胞上清液：3000 转离心 10 分钟去除颗粒和聚合物。
- 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心 10 分钟取上清。
- 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
自备物品
1.酶标仪（450nm）
2.高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3.37℃恒温箱
操作注意事项
- 试剂盒保存在 2-8℃，使用前室温平衡 20 分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
- 实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
- 浓度为 0 的 S0 号标准品即可视为阴性对照或者空白；按照说明书操作时样本已经稀释 5 倍，最终结果乘以 5 才是样本实际浓度。
- 严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育操作。
- 所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒组成
| 名称 | 96 孔配置 | 48 孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 12 孔×8 条 | 12 孔×4 条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL*6 管 | 0.3mL*6 管 | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物 A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物 B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2 张 | 2 张 | 无 |
| 说明书 | 1 份 | 1 份 | 无 |
| 自封袋 | 1 个 | 1 个 | 无 |
注：标准品（S0-S5）浓度依次为：0、50、100、200、400、800 pg/mL
试剂的准备
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按 1：20 稀释，即 1 份的 20×洗涤缓冲液加 19 份的
蒸馏水。
洗板方法
- 手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置 1min 后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板 5 次。
- 自动洗板机：每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
操作步骤
- 从室温平衡 20min 后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回 4℃。
- 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL；
- 样本孔先加待测样本 10μL，再加样本稀释液 40μL；空白孔不加。
- 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育 60min。
- 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板 5 次（也可用洗板机洗板）。
- 每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
- 每孔加入终止液 50μL，15min 内，在 450nm 波长处测定各孔的 OD 值。
结果判断
绘制标准曲线：在 Excel 工作表中，以标准品浓度作横坐标，对应 OD 值作纵坐标，绘制出标准品线性回归曲线，按曲线方程计算各样本浓度值。
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