腺相关病毒(AAV)现货

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服务名称 :腺相关病毒(AAV)现货

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腺相关病毒(adeno-associated virus, AAV)是微小病毒科(parvoviridae)家族的成员之一,是一类无法自主复制、无被膜的二十面体微小病毒,其直径约20-26nm,含有4.7kb左右的线状单链DNA作为基因组。研究中采用的重组腺相关病毒载体(recombination adeno-associated virus, rAAV)是在非致病的野生型AAV基础上改造而成的基因载体,由于其种类多样、免疫原性极低、安全性高、宿主细胞范围广(对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力)、扩散能力强、体内表达基因时间长等,rAAV被视为最有前途的基因研究和基因治疗载体之一。

AAV基因组结构
rAAV载体优势
  1. 安全性高、免疫原性低:AAV是一种复制缺陷型DNA病毒,无自主复制能力,野生型AAV依赖rep基因进行低频定点整合,rAAV不整合。目前尚无由AAV引起的人类及哺乳动物疾病报道,也是FDA批准上市的基因治疗药物中最安全的病毒载体之一。
  2. 宿主细胞范围广:AAV具有广泛的宿主范围,对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。
  3. 扩散能力强:AAV直径约20-26nm,体积小,滴度高,具有良好的扩散能力,其中AAV-PHP.eBAAV9具有跨血脑屏障的能力,在神经科学领域应用广泛。
  4. 体内表达基因时间长:AAV具有保持长期基因转录表达能力,体内表达一般3周可以达到高峰,随后持续高表达,作用时间5个月。
  5. 种类多样:AAV血清型众多,此外,根据不同的实验设计,我们还在不断的突变,筛选新的血清型(AAV1-13AAV2/1, 2/2, 2/5, 2/6, 2/8, 2/9, DJ; retro, PHP.eB…)。

基于上述特点,AAV被视为是一种高效和安全的体外及体内基因转导工具。尤其在整体水平研究中,与其他常用病毒工具载体相比,AAV具有感染过程温和长效的表达能力,是基因操作的利器。

rAAV应用
作为目前最常用的神经系统研究工具之一,rAAV因其免疫原性低,感染范围广,血清型种类多样,目前已广泛应用于神经系统研究中。
  1. 神经环路的结构是大脑工作的基础。为了理解大脑如何行使感觉信息处理、学习和记忆,行为控制等这些复杂的功能,我们必须了解其基本组织结构。因此,对脑区、神经环路和细胞的研究是研究脑科学的第一步。以AAV病毒载体作为工具来研究神经网络,既可以在全脑尺度上解析各个脑区之间相互投射关系,也可以在微米尺度描绘出神经元的轴突小结和树突棘等精细形态。不仅可以获得更高分辨率的神经网络的结构。还可以在结构的基础上理解这些神经环路可能的功能。对于特异性操控大脑的神经网络或者表征神经元的活动,可以借助神经元特异性启动子,或是经典遗传组合工具如Cre/loxPFlp/FRT等重组酶系统的使用,以实现特定细胞类型的精确靶向。
  2. 在标记的基础上,我们可以对细胞内的基因进行操作,常规的基因水平操作手段包括基因功能获取(Gain of function)和基因功能缺失(Loss of function)。涵盖了基因过表达、基因敲除、基因敲低及近年来发展迅速的基因编辑技术(CRISPR/Cas9)等。得益于病毒载体的发展,借助病毒进行基因水平的操作已成为神经科学研究的主流技术。
如果要从神经元或神经环路水平理解行为的神经机制,我们需要操控或观察神经元/神经环路的活动,同时检测活动改变与行为的因果关系。近年来,包括光遗传学技术、化学遗传学技术、成像技术等多种新技术的出现完善了生理研究的技术体系,而病毒载体在这些新技术的应用中至关重要。
 

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