产品详情
文献和实验
相关推荐
库存 :大量
英文名 :EB buffer
保质期 :一年
供应商 :上海泽叶生物科技有限公司
保存条件 :2-8℃
规格 :100ml/500ml
EB缓冲液(无菌,猪链球菌感受态制备试剂)
中文名:EB缓冲液(无菌,猪链球菌感受态制备试剂)
英文名:EB buffer
CAS:N/A
级别:N/A
分子量:N/A
分子式:N/A
纯度:N/A
储存条件:2-8℃
产品简介
操作步骤(以SC-19为例,仅供参考):
(一)感受态细胞的制备:
1.挑猪链球菌2型菌SC-19单菌落于 10mL 加5%牛血清的TSB 中,37℃ 摇床培养过夜。
2.以1:100的比例转接于TSB培养基中,37℃ 摇菌2-3h,使菌液处于对数生长期(OD600约为0.3-0.5)。
3.6000 rmp/min 离心 1min。弃上清。以100mL 菌液为例。
4.用10mL 的CTB 重悬菌液,轻柔混匀,4℃ 6000rmp/min 离心 1min ,弃上清,用10mL的CTB重悬,冰浴 30 min。
5.4℃ 6000rmp/min 离心 1min ,弃上清,用10mL 的EB(EBS) buffer 洗两次。
6.离心弃上清,用500 uL 的EB 甘油缓冲液(EB 缓冲液加15%的甘油)重悬菌体沉淀,按100uL分装。
(二)转化:
1.在100uL感受态细胞中,加入质粒混匀,加入电转杯中,电击。
2.电击后,加入500uL的 在37℃ 预热的含胎牛血清的TSB中,37℃摇床孵育 2h 。
3.将菌液涂布于相应的抗性筛选的TSA平板,28℃培养 24-32h,得到含有穿梭质粒的链球菌单菌落。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
上海泽叶生物科技有限公司
实名认证
钻石会员
入驻年限:9年