Biocoat Matrigel 基质胶使用指南

产品特性
Martrigel 基质会有色差变化（淡黄色到深红色），是由于酚红和碳酸氢盐与 CO2 的作用引起
的，但是与 5%CO2 平衡后色差即会减少。
基质胶冻融操作
收货后，若不立刻使用基质胶，应马上将仍然是冷冻固态的基质胶放进-20℃冰箱保存。
使用前须先将基质胶冻融。
冻融：
将基质胶埋于铺满碎冰的冰盒中，然后将整冰盒放入 4℃冰箱过夜溶解。（普通浓度的基质
胶，溶解时间 1-2 天；高浓度基质胶溶解时间 3-7 天）
分装：
溶解后的须分装保存，以避免反复冻融。液态基质胶，会在 10℃以上快速成胶（特别是高
浓度基质胶），因此，分装时，接触到基质胶的耗材必须预冷（如移液管、吸头、 EP 管等），
并且整个实验必须无菌、冰上操作。（高浓度的基质胶比较粘稠，用移液器不好吸取，可以
使用去掉针头的预冷注射器吸取。）
保存：
分装后的基质胶在冰上应仍然呈现液态，此时将基质胶放进-20℃保存即可。进行实验时，
取出分装好的小管， 4℃冻融。若分装好后基质胶已经凝固， 说明分装操作不能很好地保持
低温，导致基质胶已经成胶，不适宜使用。
普通浓度基质胶操作：
包被与成胶
细胞可在 0.5mm 厚度的基质胶表面生长，可以在 1mm 厚度的三维基质内生长。过度稀释的
基质胶会形成非胶质的蛋白层，可以用于细胞贴壁，但不能用于细胞的研究分化。
为保证基质胶的成胶性能与稳定，稀释浓度不应低于 1： 3，可用预冷无血清培养基稀释，
成胶后立即使用。
薄胶成胶方法：
1 冻融后，用预冷的移液枪头混匀基质胶成匀浆状。
2 将需要使用的培养板置于冰上，加入浓度为 50ul/cm2 生长面积的基质胶。
3 在 37℃放置 30min，即可使用。
肿瘤侵袭实验；
操作过程
1、冻融（对于预包被的 24 孔培养小室请参考 1.1-1.3 操作，对于自己包被好待用的 24 孔小
室，请直接从步骤 2 开始）
1.1， 从-20℃冰箱中取出产品，使其自然升温到室温。
1.2 取出培养板在细胞小室内加入 500μL 37℃预热的 PBS，37℃无 CO2 环境下孵育 2 小时。
1.3 解冻后，小心去除小室内的培养基，避免破坏 Matrigel 基质膜。
2、染色剂后标记法
细胞通过侵袭消化基质膜后迁移到下小室，采用荧光标记定量细胞。细胞的侵袭能力用终点
计算法计算得到。对于采用实时动力曲线的计算，推荐使用前标记法。
2.1 如步骤 1 准备培养板。
2.2 胰酶消化细胞单层后制得细胞悬液，溶于无血清 DMEM 培养基，推荐浓度为 5×
10^4cells/mL。
2.3 上小室中加入 500μL 细胞悬液（2×10^4 cells）。
2.4 通过进样口在下小室中加入 750μL 诱导剂。
2.5 在 37℃， 5% CO2 条件下孵育培养板和对照板 20-22 小时（由细胞类型决定）。
2.6 孵育后，小心去除上小室中的培养基及基质胶，避免破坏小室的膜及膜底侵袭转移的细
胞。
2.7 将培养小室转移到另一块 24 孔板中， 结晶紫或钙黄绿素染色。 计算。
高浓度基质胶操作：（成瘤实验）
1 注射前，必须保证 Matrigel 和细胞悬浮液在不冷冻的情况下，尽可能保持低温，保证无菌。
2 对于每只注射小鼠，冰上混合 0.5ml 细胞（2*10^6 或更多）和 Matrigel 混合液。
3 细胞注射体积需尽可能小。通常，用含有 2*10^6/ml 细胞的 250ul 预冷培养基，混合 250ul
冰浴的 Matrigel。
4 小鼠皮下注射， 19G 针用与组织样品， 23G 针用于培养的细胞。注射动作必须快速，避免
Matrigel 凝固。
5 抽出注射器时旋转以防泄漏