ECL发光液组合

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ECL Prime             ECL Select

Amersham ECL Prime 是一种高灵敏的检测试剂，其特点是信号极其稳定，允许重复曝光，在同一次实验中更容易处理多个印迹。信号强意味着Amersham ECL Prime 适合于处理低丰度蛋白质。此外，可以使用高稀释度的一抗和二抗，降低实验的总成本以及降低高背景的风险。

与其它化学发光试剂相比，Amersham ECL Prime 的性能得以提高，这是由于存在高性能增强剂和催化剂，提高了信号强度、灵敏度和持续时间。Amersham ECL Prime 特别推荐用于定量分析，例如：

• 需要高灵敏度的应用
• 蛋白丰度的变化
• 蛋白质：蛋白相互作用
• 检测蛋白质异构体
• 蛋白质降解的评价
• 翻译后修饰（PTM）

同时检测低丰度和高丰度蛋白
Amersham ECL Prime 的性能如图6.5所示，用于检测二倍稀释系列的 IFNα处理的 HeLa 细胞裂解物中的 pSTAT3，该裂解物来自 12.5μg 的总蛋白提取物。注意，灵敏性水平取决于特异性抗体与蛋白的相互作用。
 
图1 应用 Amersham ECL Prime 检测 IFNα处理的 HeLa 细胞中的 pSTAT3。注意，蛋白数量是指从细胞裂解液中提取的负载蛋白的总量。pSTAT3 仅包含该总量的一小部分。对照通道含有 6.25μg 未处理细胞的总蛋白。

Amersham ECL Prime 的另一个优点是信号强，可使用高稀释度抗体（图2）。如果用于检测的抗体量稀少，Amersham ECL Prime 将节约成本。

此外，推荐配合使用Amersham Hybond PVDF 膜，因为高蛋白结合能力带来高灵敏度。一抗和二抗应分别从1:1000 稀释至1:50,000 和1:50,000 稀释至1:250,000。如果选暗室压片法，Amersham ECL Prime 也与胶片兼容。

Amersham ECL Select  是另一种类型的高灵敏度的化学发光检测试剂，是Amersham  ECL产品家族中灵敏度高的检测试剂。Amersham ECL Select 与 Amersham ECL Prime 的检测动态范围是互补的。Amersham ECL Select的卓越信号强度使其适合于最苛刻的WB应用，如微量蛋白的检测。由于光输出与检测到的蛋白量成正比，因而可在单个印迹膜上对强弱信号进行精确定量。
Amersham ECL Select 在WB实验的检测过程中，也会影响上游步骤。例如，如果使用 Amersham ECL Select 进行检测，使用的一抗可被高度稀释。这降低了成本，并且避免背景影响弱信号的检测。Amersham ECL Select特别适用于定量分析，例如:

• 需要高灵敏检测的应用
• 蛋白丰度的变化
• 蛋白与蛋白相互作用
• 检测蛋白质异构体
• 蛋白降解的评价
• 翻译后修饰（PTM）
• 同时检测低丰度和高丰度蛋白质

Amersham ECL Select的性能如图6.9所示。在293T细胞裂解液两倍稀释系列中检测到内源性TAB 1，起始于总蛋白提取物2μg。注意，灵敏度水平取决于特异性抗体与蛋白的相互作用。
图6.9. 293 T细胞裂解物中内源性TAB-1的免疫印迹检测。Amersham ECL Select 的高信号强度提供更亮的条带和高灵敏度的检测。

高灵敏度、高信号强度以及宽线性动态范围使得Amersham ECL Select适用于定性和定量分析。AmershamECL Select产生非常高的光输出，保证了实验中可使用高稀释度的抗体。
下图所示的两倍稀释的NIH/T3T细胞裂解物中PP2A的WB检测表明，在不同的一抗稀释度下，使用Amersham ECL Select可以检测微量的蛋白。