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克隆性 :多克隆
如果您对该产品感兴趣,详情咨询欢迎拨打Cytiva智荟专线400-810-9118,并报暗号“丁香通”,即可得神秘小礼物一份哦!二抗种类需要根据一抗的种属进行选择。例如,如果一抗是IgG同种型,来源于山羊,则二抗必须是在其他物种中产生的抗山羊IgG抗体,因为它将结合一抗的Fc区。 二抗的孵育过程与一抗孵育类似。 抗体稀释比例应遵循生产商说明书,1:100到1:500000可选。Amersham ECL Prime(二抗稀释50,000倍)(点击查看ECL prime 产品) 及Amersham ECL Select (二抗稀释250,000倍)点击查看ECL Select 产品)等高灵敏发光液需较低抗体浓度即可 在选择二抗时,须考虑是否适合当前的检测方法。可以选择预标记的二抗,也可以使用试剂盒自行标记,以适用于多数应用。 |
Amersham ECL HRP偶联二抗可选择的规格如下:
Amersham ECL Plex CyDye偶联二抗
它是 ECL Plex 、Cy3- 及 Cy5- 偶联的抗体,利用 CyDye 荧光标记,可进行多波长扫描,无需 Stripping 和 Reprobing,减少误差,高特异性检测蛋白 Amersham ECL Plex二抗用Cy3或Cy5 CyDye荧光染料标记。它们可直接与兔和小鼠的一抗结合。此外,可以使用Cy2、Cy3或Cy5抗体标记试剂盒标记感兴趣的特定抗体。通过使用Cy2标记的二抗,可以在同一张膜上检测三种蛋白(三重检测)。 为了获得高质量的Western blotting结果,以下几点有助于解决低信噪比相关的问题。
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在一些应用中,需要检测同一张膜上多个蛋白,尤其是无法使用前述的多通道荧光检测方法进行定量分析时,可以通过剥离(strap)和二次孵育(reprobe)来实现,但是会有损失膜上蛋白的风险。剥离和二次孵育可以实现不同一抗与印迹点结合,节省时间和样品。然而,剥离条件可能会导致蛋 |
下表阐述了 优化剥离过程的策略
- 第一种策略中,如果抗体亲和力和每种蛋白质的丰度都近似相等,那么先检测哪种蛋白并不重要。
- 第二种策略强调首先用亲和力最低的抗体检测相似丰度蛋白的重要性。该策略确保先进行不太剧烈的洗脱,检测效果较好。
- 第三种策略说明了一抗亲和力相近的情况下,先检测低丰度蛋白的重要性。
- 第四个策略很难评估。一般来说,最好先检测丰度最低的蛋白,因为蛋白损失可能对检测低丰度蛋白影响更大。
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