Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile

保存条件 ：-20℃

保质期 ：N/A

英文名 ：Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile

库存 ：N/A

供应商 ：Hongene/上海兆维

CAS号 ：N/A

规格 ：＞95% by SDS-PAGE

 

产品描述：Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile是经大肠杆菌表达、纯化的来源于嗜冷海洋细菌的重组蛋白。能特异性识别DNA单链或双链中的尿嘧啶残基，并从DNA上水解释放游离尿嘧啶。对RNA无活性。该酶主要用于PCR扩增产物的防污染。大肠杆菌来源的尿嘧啶-DNA 糖基化酶较为耐热，经95℃，10min处理仍会残留有少量的尿嘧啶-DNA 糖基化酶活性，导致含有dU碱基的PCR产物的降解。来源于嗜冷海洋细菌的Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile 在50℃，2min即完全失活，在进行PCR扩增前，在PCR混合液中添加尿嘧啶-DNA 糖基化酶（热敏性），25℃，10min即可消除以往PCR产物的残留污染，由于尿嘧啶-DNA 糖基化酶（热敏性）在PCR循环的94℃变性一步便可被灭活，因此不会影响新的含dU的PCR产物。

 

来源：重组大肠杆菌

 

规格：1U/μL

 

活性单位定义：37℃条件下，1小时降解1μg含尿嘧啶碱基的单链DNA的酶量为1U。

 

酶存储缓冲液：20mM Tris-HCl (pH8.0), 0.1mM EDTA, 100mM KCl, 1mM DTT, 0.5%(v/v) Tween-20, 0.5%(v/v) NP-40,50%(v/v) glycerol.

 

相关产品推荐：Taq DNA Polymerase, Cat#ON-007; Uracil-DNA Glycosylase(UNG),E.coli, Cat#ON-056.

操作要点：
 

1. Uracil-DNA Glycosylase (UNG),E.coli  失活条件为95℃ 10min，但是Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile的失活条件为50℃ 2min。

 

2. 在缺少稳定剂的buffer中（如PCR buffer: 10mM Tris-HCl, pH8.0, 50mM KCl, 2.5mM MgCl₂) ，酶随着温度的升高而加速失活。

 

3. 建议50μL PCR反应体系中加入1U的Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile。

 

4. Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile在15~25℃范围内，拥有100%的酶活。

 

储藏温度：-20℃

 

质控检测：无DNase，Nickase和 RNase污染

PCR carry-over prevention: 以5ng dUTP-containing PCR 产物为模板扩增200bp目的DNA。在扩增前加入1U Uracil-DNA Glycosylase (UNG), heat-labile 25℃，10min,无产物进行扩增。

 

纯度：SDS-PAGE纯度：大于95%

参考文献：

1. H. Sobek, M. Schmidt, B. Frey, K. kaluza. FEBS Letters. 388, 1-4(1996).