Alkaline Phosphatase，TAB5

保存条件 ：-20℃

保质期 ：N/A

英文名 ：Alkaline Phosphatase，TAB5

库存 ：N/A

供应商 ：Hongene/上海兆维

CAS号 ：N/A

规格 ：＞90% by SDS-PAGE

 

产品描述：Alkaline Phosphatase, TAB5 非特异性的催化DNA和RNA 5'和3'端的磷酸单酯键，也可以催化NTPs和dNTPs。80℃ 2 min可完全失活。

 

来源：重组大肠杆菌

 

规格：2.5U/μL

 

活性单位定义：1单位活性定义为37℃，30分钟内，对限制性内切酶作用的5'端内陷的1μg pUC19 质粒去磷酸化所用的酶量。去磷酸化定义为在自连反应中对自身环化的抑制率＞ 95%，通过转化到DH5α进行判断。

 

酶存储缓冲液：10mM Tris-HCl , 1mM MgCl₂, 0.01mM ZnCl₂, 50%(v/v) glycerol, pH7.4, 25℃.

 

配套溶液：10X Phosphatase Reaction Buffer, Cat#ON-180, 500mM Bis-Tris-Propane-HCl , 10mM MgCl₂, 1mM ZnCl₂, pH6, 25℃.

 

相关产品推荐：10X Phosphatase Reaction Buffer, Cat#ON-180；T7 RNA Polymerase，Cat#ON-004；T4 RNA Ligase 1，Cat#ON-081； RNase inhibitor, Cat#ON-039; High Yield T7 RNA Synthesis Kit, Cat#ON-040

操作要点：
 

反应流程：

DNA为底物：

1. 按下列配方配置反应液：

5'-Phosphate-DNA	1μg
10X Phosphatase Reaction Buffer	2μL
Alkaline Phosphatase, TAB5	2.5~5 units
Nuclease-free H2O	To 20μL

2. 37度保温30分钟

3. (可选）80度2分钟热失活Alkaline Phosphatase, TAB5。

RNA为底物：

1. 按下列配方配置反应液：

5'-Phosphate-RNA	1μg
Nuclease-free H2O	To 15μL

2. 65度保温5~10分钟，然后立刻放冰上

3. 反应管中加入如下试剂

15μL	Heat denatured RNA from step 1 (above)
2μL	10X Phosphatase Reaction Buffer
2.5~5 units	Alkaline Phosphatasae, TAB5
20 units	RNase inhibitor (Recommend)
20μL	Total reaction volume

 

4. 37度保温30分钟

 

5. 选用下列一种方式终止反应：

A）直接放入-20度或-70度冰箱；

B）加入EDTA至终浓度大于2mM；

C）酚氯仿抽提，然后盐/醇沉淀RNA
 

储藏温度：-20℃

质控检测：无DNase、Nickase、RNase污染

纯度：SDS-PAGE纯度：大于90%

参考文献：
 

1. Maria Rina, Charalambos Pozidis, et al. Eur. J. Biochem. 267, 1230-1238 (2000).

2. Ellen Wang, Dimitris Koutsioulis, et al. J. Mol. Biol. 366, 1318-1331(2007).

3. Ping Li, Jon Beckwith, et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA.85,7685-7689(1988).