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文献和实验
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库存 :6
英文名 :ALiCE® Cell Free Protein Expression Kit (Plant Cell Lysate)
供应商 :Merck
保存条件 :−70°C
规格 :6 x 50 μL;
创新的蛋白表达系统,不依赖细菌或细胞,表达蛋白的产量最大提高到3mg/ml。在表达膜蛋白、有毒蛋白、二硫键蛋白、抗体片段等方面具有独特优势。可以使用线性模板,不需要繁琐的载体构建过程,实现蛋白的高通量合成和筛选。
传统的体内表达系统都是利用 DNA 重组实现目的蛋白的表达。然而体内表达一直存在表达量有限,培养成本高、周期长、不正确的蛋白糖基化,还存在内毒素、包涵体,操作技术要求高等瓶颈。
无细胞表达系统是以细胞裂解液为基础,在试管中进行的蛋白表达。开放性系统赋予蛋白表达的灵活性,无细胞蛋白表达系统在表达膜蛋白、有毒蛋白、二硫键蛋白、抗体片段等方面具有独特优势。
无论是简单还是复杂的蛋白质,无细胞蛋白质合成系统均可实现高产量。
ALiCE"无细胞蛋白质表达试剂盒是一种独创的真核无细胞系统,可利用植物细胞裂解物在批量处理模式下将蛋白质产量提升到前~所未~有的3mg/mL。ALiCE"的强大之处在于完整的细胞器,可利用活性线粒体提供持续的能量供应。此外,微粒体(内质网重组形成的囊泡)还能够对复杂蛋白质进行折叠和翻译后修饰,包括二硫键和糖基化。
特点和优势
1. 仅需简单的 一步法,可将蛋白质产量提升到 3mg/mL;
2. 价格合理,但蛋白质产量高出30倍·技术经过500多种蛋白质的反复验证;
3. 工作流程经过简化,只需极少的操作即可开始反应,并且包含的去污剂有助于轻松回收蛋白质(包括微粒体中的蛋白质)。
图 1.
荧光素酶来源于海洋桡脚类动物Gaussia princeps,它是一种球状蛋白(19 kDa),其活性形式具有五个二硫键。以在25°C下孵育48小时、70% RH、500 rpm 的条件生产微粒体蛋白质,并通过His-Tag 亲和色谱进行纯化。通过催化腔肠素氧化形成coelenteramide,同时产生发光反应(Aem)=475nm,进行活性测定。荧光素酶在纯化过程中被浓缩,产生更高的任意发光值。
默克生命科学
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