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文献和实验
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CAS号 :LD03
保质期 : 选择规格: 100nmol
库存 :100nmol
供应商 :dojindo
英文名 :Lipi-Red试剂
规格 :100nmol
Lipi-Red试剂,脂滴检测(红色),脂滴定位,组织脂滴成像,货号;LD03
特点:
● 高特异性脂滴定位
● 可进行组织脂滴成像
● 多种颜色可供选择
概述
Lipi系列探针是高脂肪亲脂性小分子探针,其在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。活细胞和固定细胞中的脂滴都可以使用本试剂清楚地观察。
原理
脂滴(脂肪滴,Lipid droplets, LDs)由中性脂肪组成,主要包括甘油三酯和胆固醇酯,其外层被一层单层磷脂分子包裹。而且脂滴不仅在脂肪细胞中存在,在真核生物中也普遍存在。最 新的研究表明,以前认为脂滴仅是一个简单的脂质储存器,但最近的研究表明其在调节脂质代谢1),自噬2)和细胞衰老3)等方面都起着重要作用,因此需要进一步详细地研究脂滴形成·成长·融合·分解的机制。Lipi系列探针是高脂肪亲油性小分子探针,可在疏水环境例如脂滴中发出强荧光。Lipi探针染色后,无须洗涤即可观察到脂滴。
检测条件:
* Lipi-Blue :Ex:405 nm, Em:450–500 nm
* Lipi-Green:Ex:488 nm, Em:500–550 nm
* Lipi-Red:Ex:561 nm, Em:565–650 nm
* Lipi-Deep Red:Ex:640 nm, Em:650–700 nm
染色条件:
在HeLa细胞培养基中加入200 μmol/l油酸,过夜培养后,用PBS清洗细胞,并分别加入不同颜色的Lipi探针(Lipi-Blue/Green/Deep Red:0.1 μmol/l、Lipi-Red: 1 μmol/l) 染色15 min后观察。
如何制备油酸溶液
请参考Q&A“油酸溶液的制备和加入细胞的方法”。
与竞争品比较
Lipi系列荧光探针大幅度地改善了现有脂滴染色试剂存在的问题 (如选择性,滤波器的适应性,荧光滞留性)。而且 Lipi系列荧光探针也适用于多重染色实验,可选颜色更多。
同仁化学试剂 | 其他品牌(T公司) | ||||||
Lipi-Blue | Lipi-Green | Lipi-Red | Lipi-Deep Red | Oil Red O (比色) |
Nile Red | 试剂B | |
活细胞染色 | 〇 | 〇 | 〇 | 〇 | × | 〇 | 〇 |
固定细胞染色 | 〇 | 〇 | 〇 | 〇 | 〇 | 〇 | 〇 |
对脂肪滴的选择性 (低背景) |
〇 | 〇 | 〇 | 〇 | × | × | △ |
与其他试剂的共染色*1 | 〇 | 〇 | 〇*2 | 〇 | n.d. | ×*3 | 〇 |
活细胞内的滞留性(24h) | 〇 | 〇 | × | × | n.d. | × | × |
*1. 关于共染色时推荐的荧光滤光片,您可以参考网页下方Q&A“共染时推荐的荧光滤光片”。
*2. 与绿色荧光共染色时,推荐使用550 nm以下的绿色荧光滤光片。
*3. 用GFP的滤光片(500~540 nm)时会串色。
产品特点
特点1:与抗体检测方法高度相关
用4%PFA固定HepG2细胞后,用1 μmol/l Lipi-Red 染色。 然后在脂滴膜上用抗ADFP抗体荧光标记,免疫染色,该抗体可以特异性标记脂滴膜上的蛋白质 (Adipophilin; ADFP)。实验证明Lipi-Red 与脂滴上蛋白质ADFP的定位高度相关。
<检测条件>
Lipi-Red:Ex: 405 nm / Em: 450-500 nm,
抗ADFP抗体(Alexa Fluor 647):Ex: 640 nm / Em: 650-700 nm
特点2:高特异性定位脂滴
在HeLa活细胞中加入油酸,并用1μmol/L Lipi-Red和100 nmol/l Nile Red(T公司)染色。该结果显示Nile Red会染上脂滴以外的其它细胞质。
<检测条件>
Lipi-Red: Ex: 561 nm / Em: 565 - 650 nm
Nile Red:Ex: 561 nm / Em: 565-650 nm
特点3:光谱范围更窄,不易串色(Lipi-Red vs Nile Red)
在单通道情况下,Lipi Red和Nile Red(T公司)染色HepG2会用G激发观察红色荧光。而在多重染色情况下,可能会用B激发观察绿色荧光,此时Nile Red会出现串色现象。
在用Lipi-Red染色的细胞中,确认了由于G激发引起的红色荧光,并且没有确认由于B激发引起的绿色荧光泄漏。 另一方面,在用尼罗红染色的细胞中,观察到由于G激发引起的红色荧光,但是由于B激发而观察到绿色荧光的泄漏。
特点4:荧光在细胞中的滞留时间长
分别用Lipi系列、Nile Red和市售的试剂B染色HepG2细胞,观察在培养30 min和24 h的荧光图像。
<脂肪细胞染色实验例>
(1)将3T3-L1细胞(1.5x104cells/孔)接种在µ-Plate 96孔板(ibidi)的各孔中,并在37℃ 5% CO2培养箱内培养。
(2)按照常规方法诱导分化为脂肪细胞。
(3) 去除上清液,用DMEM(25 mmol/l葡萄糖, 10% FBS, 无酚红)洗涤两次。
(4)加入用DMEM(25 mmol/l葡萄糖,10%FBS,无酚红)制备的每种染料的工作溶液,并在37℃下培养24 h。
(5)用荧光显微镜观察。
※试剂浓度:各2.5 µmol/l
实验例2:脂肪组织的脂滴成像
用4%PFA固定小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)后用Lipi系列染色,比较幼鼠(6周龄)和老年小鼠(31周龄)的脂滴成像图像,发现肝脏脂肪组织中的脂滴量有很大差异。
<组织样品的染色实验例>
(1)向小鼠肝脏脂肪组织(冰冻切片)中加入4%PFA(PBS),在室温下静置5 min。
(2)用PBS清洗后,加入各浓度的Lipi系列working solution(PBS),在4℃下静置24 h。
(3)用PBS清洗后,用落射型荧光显微镜进行荧光观察。
※工作液浓度:2.5 µmol/l(Lipi-Blue、Lipi-Green、Lipi-Deep Red)、25 µmol/l(Lipi-Red)
实验例3:使用细胞成像仪进行定量分析
将油酸或Triacsin C(acyl-CoA synthetase抑制剂)分别加入到HepG2细胞中,并比较脂滴的变化。在分析中,我们使用共聚焦定量细胞成像仪(横河电机株式会社 CQ1)获得每个细胞脂滴数量和面积的数据。
脂肪滴和细胞核的成像
使用共聚焦定量细胞成像仪在617/73 nm处拍摄脂滴图像,在447/60 nm处拍摄细胞核图像,在分析软体CellPathfinder中识别单个脂滴和细胞核,并计算其数量和面积。
细胞处理及脂滴染色条件
将HepG2细胞(1x103cells)接种到96孔板中过夜培养。除去培养上清液后,加入未处理(仅含FBS的DMEM培养基)、油酸(含200 μmol/l油酸和FBS的DMEM培养基)或Triacsin C(含5 μmol/l Triacsin C和FBS的DMEM培养基)过夜培养。之后用PBS 清洗2次,用4%的PFA在室温下固定5 min后,用PBS 清洗2次。最后,加入1 μmol/l Lipi-Red working solution 在室温、避光下染色2 h后,用共聚焦定量细胞成像仪进行定量分析。
脂肪滴产品种类的检测方法
产品名称 | 规格 | 货号 | |||
成像(成像) 脂滴荧光探针 |
Lipi-Blue | 10 nmol | LD01 | ||
Lipi-Green | 10 nmol | LD02 | |||
Lipi-Red | 100 nmol | LD03 | |||
Lipi-Deep Red | 10 nmol | LD04 | |||
定量(荧光酶标仪,FCM) 脂滴荧光检测试剂盒 |
Lipid Droplet Assay Kit - Blue | 1 set | LD05 | ||
Lipid Droplet Assay Kit - Deep Red | 1 set | LD06 |
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