CRISPR/Cas9：基因敲除细胞系构建服务

提供商 ：赛尔瑞成（北京）生命科学技术有限公司

服务名称 ：CRISPR/Cas9：基因敲除细胞系构建服务

赛尔瑞成采用CRISPR/Cas9系统，提供基因敲除细胞系构建服务。赛尔瑞成根据目的基因序列设计合成sgRNA，将Cas9和sgRNA基因转染目的细胞，进而敲除目的基因，并进行单克隆筛选，获得基因敲除单克隆细胞系。

 

 

CRISPR/Cas9系统作为新一代基因编辑工具，因其构建方便、设计灵活，操作简单、效率高成本低，成为基因敲除的新一代利器。该系统由有DNA切割活性Cas9蛋白和识别特异靶点的sgRNA组成。Cas9是一种核酸内切酶，它和sgRNA构成的复合体能与DNA分子上的特定序列结合，并在PAM序列(几乎存在于所有基因)上游切断DNA双链。DNA被切断后，细胞会启动DNA损伤修复机制，造成基因的缺失、移码、插入等随机突变模式，达到修复双链断裂的目的，同时造成靶向基因敲除。

CRISPR/Cas9：稳定细胞系构建服务流程

内容	详细信息	服务周期
gRNA 设计合成及载体构建	gRNA 设计及合成 、载体构建、质粒测序及制备	2-3 周
转染	慢病毒侵染	2-3 周
单克隆细胞制备	单克隆细胞稀释培养、筛选、PCR鉴定、获得基因敲除单克隆细胞株	5-8 周
鉴定	测序鉴定	2-3 周
送货	提供项目COA、稳定克隆

 

案例展示：
1．构建慢病毒载体的crispr sgRNA的单质粒系统。
2．经过293T细胞转染，包装得到慢病毒。
3．通过慢病毒转导的方式感染目的细胞。
4．通过抗生素筛选和单克隆挑取后，扩大培养。
5．经挑取单克隆细胞后，提取得到单克隆细胞的基因组DNA，再通过PCR扩增目的基因编辑位点的上下游区段，经过TA克隆连接到PMD19T的载体上，进行测序验证，选取10个菌落测序鉴定得到单克隆的细胞是否单一。
下图是交付给客户的单克隆细胞验证结果：

 

T7E1酶切法突变体检测试验检测CRISPR/Cas9的编辑效率：
赛尔瑞成采用T7E1酶切法突变体检测试验检测CRISPR/Cas9的编辑效率。若sgRNA有效编辑了基因组DNA，则目的基因在修复后会出现碱基缺失突变现象，通过分析T7E1酶处理目标DNA片段的杂合链后的情况，从而验证Cas/sgRNA的编辑效率，用于筛选编辑效率高的sgRNA。

 

公司简介：
赛尔瑞成（北京）生命科学技术有限公司建有专业的分子生物学平台、原核发酵平台、哺乳动物细胞培养平台、蛋白纯化和制剂平台。赛尔瑞成能进行重组蛋白、多克隆抗体、单克隆抗体、基因工程抗体（包括纳米抗体、单链抗体、双特异抗体等）、细胞治疗产品的研发工作。赛尔瑞成汇聚了一批分子生物学、免疫学、细胞生物学、生物工程等方面的专家，技术团队成员均来自国内外知名科研院所和生物技术企业，拥有雄厚的研发实力和产品开发经验。


资质荣誉：

• 中关村高新技术企业
• 获得《质量体系（ISO9001：2015）认证证书》和《医疗器械管理体系（ISO13485：2016）认证证书》
• 三项发明专利“4N杂环化合物作为Th17细胞分化抑制剂的应用 CN201510134926.4”（已授权）；“RORγt活性抑制化合物及其制备方法和应用 申请号：201910456766.3”；“一种无血清低二甲基亚砜细胞冻存液及其应用  申请号：202010307890.6”
• 蛋白质表达及纯化软件系统等软件著作权4项；
• 申请商标“赛尔瑞成”、“CRGEN”等近20项；
• 公司承担的“高端免疫诊断试剂抗原及新型抗体原料公共服务平台”获中关村管委会资金支持;
• “中关村联新生物医药产业联盟”会员单位.

实验室建设：



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