TM30/P1 mRNA原位杂交试剂盒100T/盒

库存 ：35

英文名 ：详见说明书

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：一年

供应商 ：上海西格

保存条件 ：4°C保存

规格 ： 100T/盒

准备工作：
固定液：4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)；1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g，柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O，分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。

产品名称	TM30/P1 mRNA原位杂交试剂盒100T/盒
规格	100T/盒
货号	XG-Y7669

产品名称  TM30/P1 mRNA原位杂交试剂盒100T/盒
规格   100T/盒
特异性 人    
标记方式    3’—尾段标记
保存条件    4°C保存一年
试剂盒内容  1.TM30/P1 寡核苷酸探针杂交液 2ml；
2.预杂交液 2ml；
3.胃蛋白酶（×10;Pepsin） 2ml；
4.封闭液 5ml；
5.生物素化鼠抗5ml；
6.SABC-POD 5ml；
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
操作程序：
注意：最重要的是及时固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC处理，以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外，过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2．细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养，条件为37℃和5%的CO2，所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3．培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定：固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤，干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4．30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合，室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定：胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7．预杂交：湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体，不洗。
8．杂交——按每张切片20μι杂交液，加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后，盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9．杂交后洗涤：揭掉盖玻片，37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次；37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色，重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液：37℃30分钟。甩去多余液体，不洗
11.滴加生物素化鼠抗：37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶：37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色：使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂Ａ，Ｂ，C各一滴，混匀，加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染，充分水洗。
16.酒精脱水，二甲苯透明，封片。
二．石蜡切片
如果有条件的话，应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后，及时予以固定。固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.0-7.6)，含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块，固定1小时即可，较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感，如动物大脑，固定时间30-40分钟，一般不要超过1小时。
1．常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2．玻片的处理：一般采用多聚赖氨酸或APES。
3．石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶，混匀)，37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间，例如5分钟,10分钟，20分钟，30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
注意事项：
TM30/P1 mRNA原位杂交试剂盒100T/盒由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数，加上基因仅由四个碱基排列组合而成，因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照，基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时，用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释，一般稀释2—10倍；并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况；如果出现大量的细胞核着色，往往和标本固定时间过长有关，应重新处理标本。
下列是公司正在热销的产品：
原代神经元细胞特制无血清添加剂Many types of cells包装：1ml盐酸伊立替康-d10Irinotecan-d10 Hydrochloride质量规格：美国进口
人结直肠腺癌细胞;HCT-8 [HRT-18] 大鼠卵巢颗粒细胞完全培养基 100mL硫酸卡那霉素Kanamycin sulfate质量规格：美国进口
EMT-6 小鼠癌卡那霉素AKanamycin A质量规格：美国进口
ERBB2 Others Rhesus 恒河猴 ErbB2 / HER2 人细胞裂解液 (阳性对照) 卡那霉素B硫酸盐Kanamycin B sulfate质量规格：美国进口
杂交瘤(B类);Z1510C6D10F4G6卡那霉素A硫酸盐Kanamycin A Sulfate质量规格：美国进口
长白山猪胚胎皮肤成纤维样细胞;201184苯并［g,h,i］芘(标准品)Benzo[ghi]perylene质量规格：分析标准品
BHK细胞，幼仓鼠肾细胞 人胰腺癌细胞,CFPAC-1细胞 CM-R093大鼠胎儿真皮成纤维细胞完全培养基100mL1-十八1(标准品)1-Octadecene质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC)
大鼠胰腺外分泌腺细胞;AR42J辛胺(标准品)n-Octylamine质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC)
RTN4R Others Human 人 RTN4R / NOGOR 人细胞裂解液 (阳性对照) 十八烷(标准品)Octadecane质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC)
人骨骼肌成肌细胞cDNAHSkMM cDNA2-辛酮(标准品)2-Octanone质量规格：分析标准品,≥99.5%(GC)
小耳猪肺细胞;SEP-L1丹酚酸C（标准品）质量规格：HPLC≥98%，标准品Salvianolic acid C
PTPN12 Others Human 人 PTPN12 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) 丹酚酸D(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Salvianolic acid D
肾动脉内皮细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)胆(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Cholesterol
散鳞镜鲤尾鳍细胞;YZ21 人成纤维细胞，Hs 578Bst细胞 HO-8910PM(高转移卵巢癌细胞)胆质量规格：>95%,BRCholesterol
人结直肠癌细胞;T84丹蒽醌（标准品）质量规格：含量测定1,8-Dihydroxyanthraquinone
TM30/P1 mRNA原位杂交试剂盒100T/盒人脐带单核细胞完全培养基 100mL亲和硅烷shēng huà shì jì容量：25000u
143TK细胞，人胸腺激酶缺陷性细胞系 鼠伤寒沙门氏菌Ta100 大鼠肾小球系膜细胞;HBZY-1减蓝6B;减性蓝6B;六蓝光减染天蓝 clkcli bluq 6B;Nicholson bluq;Triphqnyl tricMinotriphqnylccrbinol sulfonic ccid wo7ium sclt;C.I.42765 134-80-7
CX3CL1 Protein Canine 重组狗 Fractalkine / CX3CL1 蛋白 (Fc 标签)溴化青;青化溴 Cycnogqn broMidq 206-68-3
MG-63(人骨肉瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 小鼠 CD320 / 8D6A 人细胞裂解液 (阳性对照) 牛血清白蛋白标准溶液shēng huà shì jì容量：1公斤
犬胸腺细胞;cf2ThCollagenII 1g Worthington原装
特点：
1. 产品仅供科研安全、快速、重复性好；
2. 特异性100%，灵敏度超过90%；
3. 探针性能稳定，低温保存一年以上；
4. 荧光信号强，结果判定直观可靠；
5. 操作简单，定位精准，无实验污染。