Rap1b mRNA原位杂交试剂盒100T/盒

Rap1b mRNA原位杂交试剂盒100T/盒

价格: 询价

品牌:西格

货号:XG-Y7477

收藏

产品详情

相关推荐

库存 :33

英文名 :详见说明书

CAS号 :详见说明书

保质期 :一年

供应商 :上海西格

保存条件 :4°C保存

规格 : 100T/盒

注意事项:
Rap1b mRNA原位杂交试剂盒100T/由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
产品名称 Rap1b mRNA原位杂交试剂盒100T/
规格 100T/
货号 XG-Y7477

产品名称  Rap1b mRNA原位杂交试剂盒100T/
规格   100T/盒
特异性 小鼠    
标记方式    3’—尾段标记
保存条件    4°C保存一年
试剂盒内容  
1.Rap1b 寡核苷酸探针杂交液 2ml
2.预杂交液 2ml;
3.胃蛋白酶(×10;Pepsin) 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。

准备工作:
产品仅供科研固定液:4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g,柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。

特点:
1. 安全、快速、重复性好;
2. 特异性100%,灵敏度超过90%;
3. 探针性能稳定,低温保存一年以上;
4. 荧光信号强,结果判定直观可靠;
5. 操作简单,定位精准,无实验污染。

操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。

下列是公司正在热销的产品:
1-Monopalmitin  中文名:1-棕榈酸单甘油酯  分子式:C19H38O4    载脂蛋白   英文名称:   Apolipoprotein   规格:   48T/96T   英文缩写:   AI

1-Methyl-L-4,5-dihydroorotic acid  中文名:1-甲基-L-4,5-二氢乳清酸  分子式:C6H8N2O4    胸腺表达趋化因子 (TECK)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装
1-Methyl-aminomethyl naphthalene  中文名:  分子式:C12H13N    胸腺基质细胞生成素 (TSLP)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装
1-Methyl-5-nitro-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名:  分子式:C14H17N3O4    尿激酶型纤溶酶原激活因子 (uPA)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装
1-Methyl-5-amino-1H-benzimidazole-2-butanoic acid ethyl ester  中文名:  分子式:C14H19N3O2    尿激酶型纤溶酶原激活因子受体 (uPA-R)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装
Humanpunjecellaoaibody,PCA-1/YoELISAKit 人抗浦肯野细胞抗体/Yo抗体(PCA-1/Yo)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装  (R)-4-Benzyl-2-oxazolidinone  102029-44-7  中文名:(R)-4-苄基-2-恶唑烷酮  分子式:C10H11NO2  度:98.0%   

HumanProinsulin,PIELISAKit 人胰岛素原(PI)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装  1-Benzyl L-aspartate  中文名:L-天冬氨酸1-苄酯  分子式:C11H13NO4  度:98.0%
Humanpolymyositis-sclerosisaibody,PM-Scl/PM-1ELISAKit 人抗多发性肌炎硬皮病抗体(PM-Scl/PM-1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装  (tert-Butoxycarbonyl)oxycefcapene pivoxil  105889-80-3  中文名:  分子式:C28H37N5O10S2  度:98.0%  关键词: 
Humanpolyimmunoglobulieceptor,poly-IgRELISAKit 人多球蛋白受体(poly-IgR)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装  1,5,15-Tri-O-methylmorindol  中文名:  分子式:C18H16O6  度:98.0%
HumanPoliomyelitisVirus,PV-IgGELISAKit人抗副流感病毒IgG抗体(ai-PIVIgG)ELISA试剂盒规格:96T/48T  2-Amino-6-methylbenzothiazole  2536-91-6  中文名:2-氨基-6-甲基苯并噻唑  分子式:C8H8N2S
兔骨钙素(rabbit Osteocalcin)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装     6,6'-Di-O-sinapoylsucrose  中文名:6,6'- 二芥子酰基蔗糖  分子式:C34H42O19 

兔骨成型蛋白-2(rabbit BMP-2)   作用:   ELISA   规格:   48T/96T   进口分装  6-(5-Chloropyridin-2-yl)-7-hydroxy-6,7-dihydro-5H-pyrrolo[3,4-b]pyrazin-5-one  中文名:  分子式:C11H7ClN4O2  度:98.0%
兔骨保护素elisa试剂盒   兔骨保护素试剂盒   规格型号:96T/48T   兔骨保护素试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:兔骨保护素试剂盒、兔骨保护素elisa试剂盒   保存条件:2-8   保质期:6个月。  4-Hydroxy-4-(methoxycarbonylmethyl)cyclohexanone  81053-14-7  中文名:  分子式:C9H14O4 
兔骨保护素<破骨细胞抑制因子>   英文名称:   Rabbit Osteoprotegerin   规格:   48T/96T   英文缩写:   OPG  4-Hydroxythiobenzamide  25984-63-8  中文名:  分子式: 
兔骨保护素(OPG)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T  4-Hydroxysapriparaquinone  120278-25-3  中文名:  分子式:C20H26O4
Rap1b mRNA原位杂交试剂盒100T/D-Pinitol  中文名:D-松醇  分子式:C7H14O6  度:98.0%  兔肌钙蛋白Ⅰ(Tn-)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

Glycerol 1-(26-hydroxyhexacosanoate)  中文名:  分子式:C29H58O5  度:兔子白介素10(IL-10)ELISAKit   ELISA.   96T/48T           
2-C-Methyl-D-erythritol  中文名:2-C-甲基-D-赤藓糖醇  分子式:C5H12O4  度:98.0%  兔子白介素1可溶性受体I(IL-1sR)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
2-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)propane-1,2-diol  中文名:  分子式:C8H16O4  度:98.0%  兔钩端螺旋体IgG(LepIgG)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
Linderaspirone A  中文名:  分子式:C34H32O10  度:98.5%  兔凝血酶原片段F1+2(F1+2)ELISAKit   ELISA.   96T/48T
 

上海西格生物科技有限公司

实名认证

钻石会员

入驻年限:5年

联系人:韩丽君

地址:上海

电话联系

立即询价

换一个