产品详情
文献和实验
相关推荐
库存 :XG-Y7342 50
英文名 :详见说明书
CAS号 :详见说明书
保质期 :一年
供应商 :上海西格
保存条件 :4°C保存
规格 : 100T/盒
注意事项:P27 mRNA原位杂交试剂盒100T/盒由于特定的mRNA序列仅占总mRNA的极少数,加上基因仅由四个碱基排列组合而成,因此原位杂交容易出现非特异性染色。通过不加探针和用阴性标本做对照,基本可以确定染色是否为特异性的。有明显的非特异性染色现象时,用预杂交液对含探针的杂交液进行稀释,一般稀释2—10倍;并应加强探针杂交后的洗涤。如果有少量的细胞核着色属于正常情况;如果出现大量的细胞核着色,往往和标本固定时间过长有关,应重新处理标本。
产品名称 | P27 mRNA原位杂交试剂盒100T/盒 |
规格 | 100T/盒 |
货号 | XG-Y7342 |
产品名称 P27 mRNA原位杂交试剂盒100T/盒
规格 100T/盒
特异性 人、大鼠、兔、小鼠
标记方式 3’—尾段标记
保存条件 4°C保存一年
试剂盒内容 1.P27 寡核苷酸探针杂交液 2ml;
2.预杂交液 2ml;
3.胃蛋白酶(×10;Pepsin) 2ml;
4.封闭液 5ml;
5.生物素化鼠抗5ml;
6.SABC-POD 5ml;
7.生物素化过氧化物酶 5ml。
准备工作:
产品仅供科研固定液:4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6);1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)
3%柠檬酸——100ml蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7•H2O)3g,PH2.0左右。
2×SSC——1000ml蒸馏水中加氯化钠17.6g,柠檬酸三钠(C6H5O7Na3•2H2O,分子量294)8.8g。
0.5×SSC——300ml蒸馏水加100ml 2×SSC即可。
0.2×SSC——270ml蒸馏水加30ml 2×SSC即可。
20%甘油——20ml甘油加80ml蒸馏水即可。
原位杂交用PBS(1000ml蒸馏水加氯化钠30g,Na2HPO4•12H2O 6g,NaH2PO4•2H2O 0.4g),PH7.2-7.6。
特点:
1. 安全、快速、重复性好;
2. 特异性100%,灵敏度超过90%;
3. 探针性能稳定,低温保存一年以上;
4. 荧光信号强,结果判定直观可靠;
5. 操作简单,定位精准,无实验污染。
操作程序:
注意:最重要的是及时固定,并在固定液中加入0.1%的DEPC处理,以抑制RNA酶对mRNA的分解作用。此外,过度固定对原位杂交有明显的不利影响。
1.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。切片厚度10-20μm。
2.细胞在多聚赖氨酸处理的盖玻片上进行培养,条件为37℃和5%的CO2,所用培养基为Dulbecco基础培养基。细胞长好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分钟×3次。
3.培养细胞和冰冻切片均可用下述方法固定:固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 20--30分钟。蒸馏水充分洗涤,干燥后-20℃冰冻可保存2周以上。
4.30%H2O2 1份+纯甲醇50份混合,室温处理30分钟。蒸馏水洗涤3次。
5.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化5—120秒钟。有时也可以不消化。原位杂交用 PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。
6.后固定:胃蛋白酶消化后才需要。固定液为1%/0.1 M PBS(PH7.2-7.6),含有1/1000 DEPC。室温固定 10分钟。蒸馏水洗涤3次。
7.预杂交:湿盒的准备——干的杂交盒底部加20%甘油20ml以保持湿度。按每张切片20μι加预杂交液。恒温箱38-42℃2—4小时。吸取多余液体,不洗。
8.杂交——按每张切片20μι杂交液,加在切片上。将原位杂交专用盖玻片的保护膜揭开后,盖在切片上。恒温箱38-42℃杂交过夜(根据杂交情况可以调节)。
9.杂交后洗涤:揭掉盖玻片,37℃左右水温的2×SSC洗涤5分钟×2次;37℃0.5×SSC洗涤15分钟×1次; 37℃0.2×SSC洗涤15分钟×1次(如果有非特异性染色,重复0.2×SSC洗涤15分钟×1-2次)。
10.滴加封闭液:37℃30分钟。甩去多余液体,不洗
11.滴加生物素化鼠抗:37℃ 60分钟或室温120分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
12.滴加SABC:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×3次。勿用其它缓冲液和蒸馏水洗涤。
13.滴加生物素化过氧化物酶:37℃20分钟或室温30分钟。原位杂交用PBS洗5分钟×4次。
14.DAB显色:使用DAB显色试剂盒—1ml蒸馏水加显色剂A,B,C各一滴,混匀,加至标本上。一般显色20-30分钟。若无背景出现则可继续显色。也可自配DAB显色剂后显色。充分水洗。
15.必要时苏木素复染,充分水洗。
16.酒精脱水,二甲苯透明,封片。
二.石蜡切片
如果有条件的话,应尽可能地采用新鲜标本。标本离体后,及时予以固定。固定液为4%/0.1 M PBS(PH7.0-7.6),含有1/1000 DEPC。标本较大时用刀片切成厚度不超过4mm的小块,固定1小时即可,较大的标本固定不要超过2小时。某些组织对过度固定尤其敏感,如动物大脑,固定时间30-40分钟,一般不要超过1小时。
1.常规脱水、浸蜡、包埋。切片厚度6-8μm。
2.玻片的处理:一般采用多聚赖氨酸或APES。
3.石蜡切片经常规脱蜡至水。30%H2O2 1份+蒸馏水10份混合,室温5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
4.暴露mRNA核酸片段:切片上滴加3%柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶(1ml 3% 柠檬酸加2滴浓缩型胃蛋白酶,混匀),37℃或室温消化3--30分钟(视标本新旧、厚薄自行调整)。用户可以比较不同的消化时间,例如5分钟,10分钟,20分钟,30分钟。以找到最佳的消化时间。原位杂交用PBS洗3次×5分钟。蒸馏水洗1次。其余步骤和冰冻切片6-16步相同。
下列是公司正在热销的产品:
3-O-(6'-O-Galloyl)-β-D-glucopyranosylmaltol 中文名: 分子式:C19H20O12 小鼠组织因子途径抑制物(TFPI)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
3-Nitro-1-(4-octylphenyl)-1-propanone 中文名: 分子式:C17H25NO3 鸭γ干扰素(IFN-γ)ELISAKit ELISA. 96T/48T
3-Methylamino-1-(2-thienyl)-1-propanol 中文名: 分子式:C8H13NOS 大鼠活化素A受体抗体(ACV-RAb)ELISAKit ELISA. 96T/48T
3-Methyl-1-(2-piperidinophenyl)butylamine N-acetylglutamate salt 中文名: 分子式:C23H37N3O5 大鼠脑红蛋白(NGB)ELISAKit ELISA. 96T/48T
3-Methoxyfuran 中文名: 分子式:C5H6O2 大鼠血小板生成素(TPO)ELISAKit ELISA. 96T/48T
人真核翻译起始因子3aelisa试剂盒 人真核翻译起始因子3a试剂盒 规格型号:96T/48T 人真核翻译起始因子3a试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:人真核翻译起始因子3a试剂盒、人真核翻译起始因子3a elisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 2-Aminonicotinic acid 5345-47-1 中文名:2-氨基烟酸 分子式:C6H6N2O2 度:98.0%
人着丝粒蛋白Belisa试剂盒 人着丝粒蛋白B试剂盒 规格型号:96T/48T 人着丝粒蛋白B试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:人着丝粒蛋白B试剂盒、人着丝粒蛋白B elisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 2-Amino-N-(2-chloro-6-methylphenyl) thiazole-5-carboxamide 302964-24-5 中文名: 分子式:C11H10ClN3OS 度:98.0% 关键词:
人着丝粒蛋白B(CENPB)酶联吸附测定试剂盒 Human CENPB (Cenomere Protein B) ELISA Kit 2-Aminoisonicotinic acid 13362-28-2 中文名:2-氨基异烟酸 分子式:C6H6N2O2 度:98.0%
人着丝粒蛋白B(CENP-B)ELISA试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装 3-(Hydroxymethyl)cyclopentanone 113681-11-1 中文名: 分子式:C6H10O2
人长效甲状腺刺激素elisa试剂盒 人长效甲状腺刺激素试剂盒 规格型号:96T/48T 人长效甲状腺刺激素试剂盒,规格型号:96T/48T,来源:elisa试剂盒(进口分装),产品别名:人长效甲状腺刺激素试剂盒、人长效甲状腺刺激素elisa试剂盒 保存条件:2-8℃ 保质期:6个月。 2-Aminonicotinic acid 5345-47-1 中文名:2-氨基烟酸 分子式:C6H6N2O2
可溶性ENG/sCD105 英文名称: Human soluble Endoglin 规格: 48T/96T 英文缩写: ENG/sCD105 Paroxetine 中文名:盐酸帕罗西汀 分子式:C19H21ClFNO3
颗粒体蛋白Granulin 英文名称: Granulin 规格: 48T/96T 英文缩写: GRN 3-O-Acetylandrostenone hydrazone 122914-94-7 中文名:3-O-乙酰基雄酮腙 分子式:C21H32N2O2
抗紧张素‖受体︱型自身抗体 英文名称: Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies 规格: 48T/96T 英文缩写: AT1R-AA 3-Amino-4-methylbenzamide 中文名:3-氨基-4-甲基苯甲酰胺 分子式:C8H10N2O 度:98.0%
抗紧张素‖受体︱型自身抗体 英文名称: Angiotensin 2 Receptor 1 Aoaibodies 英文缩写: AT1R-AA 规格: 48T/96T Ophiopogonin D 中文名:麦冬皂苷D 分子式:C44H70O16
抗酸性0酸酶(SACP)试剂盒(比色法) Repaglinide 135062-02-1 中文名:瑞格列奈 分子式:Repaglinide 度:98.0% 关键词:
P27 mRNA原位杂交试剂盒100T/盒Ethyl2-((tert-butoxycarbonyl)amino)-3-nitrobenzoate 136285-65-9 中文名: 分子式:C14H18N2O6 人抵抗素(Resistin)ELISAKIT ELISA. 96T/48T
Trenbolone cyclohexylmethylcarbonate 23454-33-3 中文名:群勃龙环己甲基碳酸酯 分子式:C26H34O4 人骨特异性碱性0酸酶B(ALP-B)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Ceftiofur 103980-44-5 中文名:头孢噻呋盐酸盐 分子式:C19H18ClN5O7S3 人骨钙素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISAKit ELISA. 96T/48T
Cefquinome 84957-30-2 中文名:头孢喹咪 分子式:C23H24N6O5S2 人阻抑素(PHB)酶联吸附测定试剂盒 Human PHB (Prohibitin) ELISA Kit
Stanozolol 10418-03-8 中文名:康力龙 分子式:C21H32N2O 人隐花色素1(CRY1)酶联吸附测定试剂盒 Human CRY1 (Cryptochrome 1) ELISA Kit
上海西格生物科技有限公司
实名认证
钻石会员
入驻年限:5年