UMNSAH/DF-1鸡胚胎成纤维细胞丨逸漠(immocell)

注册证号 ：--

英文名 ：UMNSAH/DF-1

CAS号 ：--

库存 ：9999

供应商 ：厦门逸漠生物科技有限公司

肿瘤类型 ：详询

细胞类型 ：贴壁生长

ATCC Number ：--

品系 ：鸡细胞株

组织来源 ：鸡胚

相关疾病 ：详询

物种来源 ：鸡

免疫类型 ：详询

细胞形态 ：成纤维细胞样

是否是肿瘤细胞 ：否

器官来源 ：鸡胚

运输方式 ：复苏发货或干冰发货（顺丰快递）

年限 ：长期

生长状态 ：正常

规格 ：1*10^6

一、细胞介绍

该细胞是起源于10日龄的ELL-0鸡蛋的鸡细胞株，自发永生化。分离原代鸡胚成纤维细胞并在培养液中培养;传代直到衰老;在衰老过程中离心以保持细胞培养在30%到60%满;不衰老的克隆进行鉴定并传代不少于30次。在软琼脂上没有观察到克隆增殖，说明这些细胞是永生化而没有转化。该细胞可作为病毒增殖、重组蛋白表达和重组病毒生产的基质。

二、细胞特性

1) 来源：鸡胚

2) 形态：成纤维细胞，贴壁生长

3) 含量：>1x106

4) 污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

5) 规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

三、运输和保存

可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式

(1)干冰运输，收到后立即转入液氮或者-80度冰箱冻存或直接复苏;

(2)存活细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。

(3)收到细胞后请拍照，3天内如果发现污染，请及时拍照与我们联系。

细胞用途：仅供科研使用。

四、细胞接收后的处理

1) 收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请拍照后及时联系我们。

2) 在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜(4或5X物镜)下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20×物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，(10×，20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。

3) 观察好细胞状态后，75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h。

4) 贴壁细胞：在运输过程中贴壁细胞会有脱落的现象，如发现贴壁细胞有脱落或者脱落后抱团生长，可将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和未贴壁细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到加有按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基的原培养瓶中(或新的培养瓶中)。

5) 悬浮细胞：T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h，然后抽出瓶中的培养基和细胞1000rpm离心5分钟，弃去上清重悬后接种到新的培养瓶中(加入按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基)。

6)备注：运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 收到细胞后第一次传代建议1：2传代 。

五、细胞培养操作规程，供参考

1.培养基及培养冻存条件准备

1)准备DMEM(NaHCO3 1.5g/L)(推荐iCell-128-0001)培养基;优质胎牛血清，10%;双抗 1%;细胞冻存后复苏存活率只有50%左右，建议加大冻存密度。

2)培养条件： 气相：空气，95%;二氧化碳，5%。 温度：39℃，培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。

2. 细胞处理

1)复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，离心管加入4mL培养基混合均匀。在800-1000RPM条件下离心4-5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入T25培养瓶中培养，补加培养基至6ml。

2)细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

a. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

b. 加1ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中，置于39℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。

c. 轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加1-2mL培养液后吹匀。

d. 将细胞悬液按1：2到1:5比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。

注：第一次传代推荐传代比例为1:2，以后传代比例可根据客户需要自己决定。

3)细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

下面T25瓶为类

a.细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入1ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

b.4min 1000rpm 离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度1-2xE6/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

c.将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。