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抗体名 :14-3-3 γ (D15B7) Rabbit mAb
抗体英文名 :14-3-3 γ (D15B7) Rabbit mAb
浓度 :1mg/1ml
应用范围 :公司产品仅用于科研
保质期 :详见说明书
目录编号 :FSK12506
库存 :100
供应商 :上海抚生
克隆性 :多克隆
保存条件 :Store at -20 °C
形态 :详见说明书
亚型 :IgG
免疫原 :详见说明书
14-3-3 γ (D15B7) Rabbit mAb100 ul抗体制备过程:1.材料与试剂
a.提取的动物 Ig
b.弗氏完全佐剂和弗氏不完全佐剂
c.青霉素和链霉素
d.实验动物 兔
e.其它材料及试剂
2、选择实验活体。
3、进行动物免疫实验。
4、试取血样进行测试,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,杀死实验活体,采集全部血清。
6、纯化出抗体。
7、鉴定抗体。胎牛血清(无菌采制)
96T
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96T抗体的制备过程:
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定
得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存
建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其完全覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
抗原准备:
经常使用的抗原有:偶联多肽、偶联的小分子或化合物、天然或重组蛋白等等。
对可溶性抗原而言,为了增强其免疫原性或改变免疫反应的类型、节约抗原等目的,通常采用加佐剂的方法以刺激机体产生较强的免疫应答。
多克隆抗体和单克隆抗体的区别:
由一种克隆产生的特异性抗体叫做单克隆抗体。而同一种抗原决定簇,在机体内也可以由好几种克隆来产生抗体,形成好几种单克隆抗体混杂物,称为多克隆抗体。多克隆抗体是由异源抗原(大分子抗原、半抗原偶联物)刺激机体产生免疫反应,有机体浆细胞分泌的一组免疫球蛋白。
效价测定:采用琼脂扩散法。
⑴ 将血清倍比稀释,加入外周孔。
⑵ 中间孔加动物 Ig。
⑶ 37℃湿盒琼扩24 小时后观察结果。
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