四环素诱导系统/TRE/Tet-on/Tet-off/表达策略/AAV/病毒包装

提供商 ：布林凯斯

服务名称 ：四环素诱导病毒诱导

四环素诱导系统
四环素（tetracycline, Tet）诱导系统利用Tet及其衍生物对目的基因进行诱导表达，具有严密、高效、可控性强、表达泄露小等优点。

Tet诱导调控表达系统的作用原理
Tet系统基本原理是由诱导药物改变调控蛋白的构象，从而控制目标蛋白的表达。Tet阻遏蛋白（Tet repressor protein，TetR）与Tet操纵基因（Tet operator，TetO）DNA序列有特异的亲和能力，当细胞内无Tet存在时，TetR会与TetO结合，从而阻断下游的抗性基因表达。反之当Tet存在时，药物使TetR得构象发生改变，导致TetR与TetO分离，从而引起抗性基因的抑制解除，抗性蛋白表达使细菌产生耐药性。利用这一特性，已发展多种类型的Tet调控系统，根据其表达特点可分为：抑制型系统Tet-off和激活性系统Tet-on。
（1）抑制型系统Tet-off
其反应表达载体由Tet应答元件(Tet-responsive element，TRE)、最小CMV启动子(minimal CMV promoter，PminCMV)及目的基因组成。
当细胞内无Tet或其衍生物强力霉素(doxcycline, Dox)的存在时，tTA可与TRE结合，打开基因表达；而当Tet或Dox存在时，它们可使tTA中的TetR改变构象，则tTA将从TRE上脱落下来，使TRE中的PminCMV处于非激活状态，从而使基因表达处于关闭状态。
（2）激活性系统Tet-on
Tet-on系统与Tet-off系统的区别在于其调节蛋白质为反义Tet转录活化因子(reverse tetracycline transcriptional activator，rtTA)。rtTA是由反义TetR(reverse TetR,，rTetR)与VP16的转录活化区域融合而成。rTetR的表型与TetR相反，在无Dox时其不能结合TRE，导致基因表达关闭；而在有Dox存在时其会结合在TRE上， 导致基因表达开放。

Tet诱导调控表达系统的优点
①具有低本底和高诱导倍数的特点，无诱导时目的基因表达水平低，诱导时其表达水平增高，诱导倍数可达10,000倍；
②可进行精准调节，目的基因的诱导倍数与诱导剂的量及诱导时间存在一定的关系，所以可以完成对基因表达的精确调节；
③特异性高，在哺乳动物中无类似的DNA靶序列，因此不影响宿主基因；
④安全性高且不产生强毒性，Tet作为抗生素已被应用很长时间，且低剂量Tet即可调节基因表达，对人体较为安全；
⑤诱导时间短，加入诱导剂30 min内可检测到目的基因的表达；
⑥具有可逆性，除去诱导剂一定时间后可使该系统关闭，之后可通过加入诱导剂重新开启。

Tet诱导调控表达系统的应用
（1）体外应用
Tet系统常用于体外基因功能、蛋白质功能、以及mRNA功能的研究，也用于体外基因治疗的研究。
（2）体内应用
Tet系统被广泛应用于体内实验，如神经系统疾病研究方面、发育和病理研究和免疫反应研究中。

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