原核蛋白表达技术服务

提供商 ：百欧泰

服务名称 ：原核蛋白表达技术服务

E.coli蛋白表达服务内容

 

客户提供目的基因或基因序列，主要交付质粒DNA、表达菌株、纯度90%以上的重组蛋白质和表达产物检测报告。检测报告主要包括测序报告、实验条件、SDS-PAGE报告和COA等。

 

1.基因合成及密码子优化（可选）

基因序列通过密码子优化后，蛋白表达量可提高几倍至数十倍。

2.载体构建

包括IPTG,阿拉伯糖，热休克，冷休克诱导方式，GST，Trx，SUMO，BMP，His，HA，Flag，myc等融合标签载体的构建。提供客户正确构建的重组表达质粒。

3．表达菌株筛选

将表达质粒转化到高效的E. coli表达菌株中。SDS-PAGE电泳检测，挑选合适的单克隆菌株用于目标蛋白的表达。

可提供表达菌株：DH5α, Top10,  BL21 (DE3), BL21 (DE3) pLys, Golden, Rosetta(DE3), RosettaBlue(DE3),Rosetta gami B (DE3), C41等宿主。

提供客户含重组质粒的表达菌株。

4.蛋白表达及纯化

诱导表达目标蛋白。通过亲和层析，离子交换，疏水及凝胶过滤等多种层析方法纯化目的蛋白；可根据需求切除标签，再纯化获得目标蛋白。提供客户纯化后的目标蛋白，可按客户要求提供含纯化标签（Tag）或切除纯化标签（Tag）的最终蛋白，纯度根据客户要求可达95%以上甚至更高。

5.包涵体复性

蛋白诱导表达与包涵体纯化，数百种缓冲条件快速筛选最佳复性缓冲，采用稀释复性，透析复性，柱层析复性等多种技术获得纯度大于90%的包涵体。

6. 蛋白大规模制备

如果想要纯化获得克级蛋白，需要使用发酵罐发酵获得上百克到公斤级的菌体，百欧泰生物提供成熟的发酵罐发酵平台进行大肠杆菌或者酵母菌的高密度发酵。