产品详情
文献和实验
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供应商 ：仕诺达生物
库存 ：999
样本 ：血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本
标记物 ：猫促甲状腺素释放激素
适应物种 ：猫
应用 ：高校，中科院，研发单位
检测方法 ：ELISA
检测限 ：2.5 pg/mL – 80 pg/mL
规格 ：48T/96T
猫促甲状腺素释放激素（TRH）ELISA试剂盒
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中猫促甲状腺素释放激素（TRH）的含量。
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被猫促甲状腺素释放激素（TRH）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猫促甲状腺素释放激素（TRH）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材：
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成：
有效期：6个月
保存条件：2-8℃
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被猫促甲状腺素释放激素（TRH）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的猫促甲状腺素释放激素（TRH）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
样本处理及要求
1. 血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2. 血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3. 组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4. 细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
需要而未提供的试剂和器材：
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
试剂盒组成：
| 名称 | 96孔配置 | 48孔配置 | 备注 |
| 微孔酶标板 | 8孔×12条 | 8孔×6条 | 无 |
| 标准品 | 0.3mL*6管 | 0.3mL*6管 | 无 |
| 样本稀释液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 检测抗体-HRP | 10mL | 5mL | 无 |
| 20×洗涤缓冲液 | 25mL | 15mL | 按说明书进行稀释 |
| 底物A | 6mL | 3mL | 无 |
| 底物B | 6mL | 3mL | 无 |
| 终止液 | 6mL | 3mL | 无 |
| 封板膜 | 2张 | 2张 | 无 |
| 说明书 | 1份 | 1份 | 无 |
| 自封袋 | 1个 | 1个 | 无 |
备注：
1. 标准品浓度依次为：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL
2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
试剂盒性能
1. 检测范围：2.5 pg/mL – 80 pg/mL。
2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 pg/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。
Sample collection and storages
1. 标准品浓度依次为：80、40、20、10、5、2.5 pg/mL
2. 经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3. 样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4. 除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
试剂盒性能
1. 检测范围：2.5 pg/mL – 80 pg/mL。
2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 pg/mL。
3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。
FOR RESEARCH USE ONLY.
NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
Sample collection and storages
Serum - Use a serum separator tube and allow samples to clot for 30 minutes before centrifugation for 10
minutes at approximately 3000×g. Remove serum and assay immediately or aliquot and store samples at -20℃ or
-80℃.Avoid repeated freeze-thaw cycles
Plasma - Collect plasma using EDTA or heparin as an anticoagulant. Centrifuge samples for 30 minutes at
3000×g at 2-8℃ within 30 minutes of collection. Store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw
cycles.
Cell culture supernates and other biological fluids - Remove particulates by centrifugation and assay
immediately or aliquot and store samples at -20℃or -80℃. Avoid repeated freeze-thaw cycles.
Note: The samples shoule be centrifugated dequately and no hemolysis or granule was allowed.
Materials required but not supplied
1. Standard microplate reader(450nm)
2. Precision pipettes and Disposable pipette tips.
3. 37 ℃ incubator
Precautions
1.
Do not substitute reagents from one kit to another. Standard, conjugate and microplates are matched for
optimal performance. Use only the reagents supplied by manufacturer.
2. Do not remove microplate from the storage bag until needed. Unused strips should be stored at 2-8°C in their
pouch with the desiccant provided.
3. Mix all reagents before using.
Remove all kit reagents from refrigerator and allow them to reach room temperature ( 20-25°C)
Reagent preparation
20×wash solution:Dilute with Distilled or deionized water 1:20.
Assay procedure
1. Prepare all r e a g e n ts before starting assay procedure. It is recommended that all Standards and Samples be
added in duplicate to the Microelisa Stripplate.
2. Add standard: Set Standard wells, testing sample wells. Add standard 50μl to standard well.
3.
Add Sample: Add testing sample 10μl then add Sample Diluent 40μl to testing sample well; Blank well
doesn’t add anyting.
4. Add 100μl of HRP-conjugate reagent to each well, cover with an adhesive strip and incubate for 60 minutes
at 37°C.
5. Aspirate each well and wash, repeating the process four times for a total of five washes. Wash by filling each
well with Wash Solution (400μl) using a squirt bottle, manifold dispenser or autowasher. Complete removal of
liquid at each step is essential to good performance. After the last wash, remove any remaining Wash Solution by
aspirating or decanting. Invert the plate and blot it against clean paper towels.
6. Add chromogen solution A 50μl and chromogen solution B 50μl to each well. Gently mix and incubate for 15
minutes at 37°C. Protect from light.
7. Add 50μl Stop Solution to each well. The color in the wells should change from blue to yellow. If the color in
the wells is green or the color change does not
appear uniform, gently tap the plate to ensure thorough mixing.
8. Read the Optical Density (O.D.) at 450 nm using a microtiter plate reader within 15 minutes.
Calculation of results
1. This standard curve is used to determine the amount in an unknown sample. The standard curve is generated
by plotting the average O.D. (450 nm) obtained for each of the six standard concentrations on the vertical (Y)
axis versus the corresponding concentration on the horizontal (X) axis.
2. First, calculate the mean O.D. value for each standard and sample. All O.D. values, are subtracted by the
mean value of the zero standard before result interpretation. Construct the standard curve using graph paper
or statistical software.
3. To determine the amount in each sample, first locate the O.D. value on the Y-axis and extend a horizontal
line to the standard curve. At the point of intersection, draw a vertical line to the X-axis and read the
corresponding concentration.
4. Any variation in operator, pipetting and washing technique, incubation time or temperature, and kit age can
cause variation in result. Each user should obtain their own standard curve.
5. The sensitivity by this assay is 1.0 pg/ml
6. Standard curve
Storage： 2-8℃.
validity： six months.
FOR RESEARCH USE ONLY;
NOT FOR THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC APPLICATIONS!
PLEASE READ THROUGH ENTIRE PROCEDURE BEFORE BEGINNING!
滁州仕诺达生物科技有限公司
实名认证
金牌会员
入驻年限：5年
