mTeSR™ Plus，cGMP级别，换液灵活的hPSC维持培养基

“TeSR1”于2006年由威斯康星大学麦迪逊分校的James Thomson教授实验室的Tenneille Ludwig博士及其同事研发成功。这是只含有重组来源和人源纯化的蛋白成分的无饲养层人类胚胎干细胞（ES）培养基。最初由STEMCELL Technologies于2007年推向市场进行商品化销售，“优化后的”TeSR1（mTeSR™1）成为人多能干细胞（hPSC）无饲养层培养的全球金标准，支持了干细胞研究领域的成千上万的科研发现及论文发表。

1998
第一株人类ES细胞系由威斯康星大学麦迪逊分校的James Thomson教授实验室建立。细胞培养于包含有成分不明的血清培养基中，并需要小鼠的胚胎成纤维（MEF）”饲养层”细胞。

2000
Michal Amit及其同事发现，在没有血清的情况下，需要FGF2来维持人ES细胞处于未分化状态。

2001
徐春辉利用MEF条件培养基建立了第一个无饲养层的人ES细胞培养体系。

2006
James Thomson实验室的研究人员报导了第一种只含有重组来源和人源纯化的蛋白成分的无饲养层的人ES细胞培养基“TeSR1”。

2007
Shinya Yamanaka使用Oct3 / 4，Sox2，Klf4和c-Myc四种因子从人皮肤成纤维细胞获得了诱导多能干（iPS）细胞。

2011
James Thomson实验室的研究人员开发了E8培养基，这是一种简化后的配方，仅含有hPSC维持培养所需的关键组分。STEMCELL Technologies于2013年发布了“TeSR™-E8™”。

2013
张锋实验室的研究人员报道了可以对在mTeSR™1中维持培养的人类ES细胞进行Cas9介导的基因组编辑。

2019
mTeSR™ Plus具有更强的稳定性，可确保细胞质量，同时实现真正的灵活多样的hPSC维持培养。

稳定性提升实现灵活多样的方案

培养基的颜色代表hPSC培养72小时未换液的pH差异，上侧使用的是mTeSR™1，下侧使用的是mTeSR™ Plus。二者的起始细胞接种密度均为6孔板中每孔2 x 10^6个细胞。

 

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为什么选择mTeSR™ Plus？

• 稳定。加强了缓冲体系，使用了更稳定的成分（包括FGF2），在保证细胞质量的同时允许灵活的换液流程。

• 更快的生长。细胞形态更好，增长更迅速。维持更好的细胞形态和更佳的细胞生长参数。

• 更高的克隆形成效率。与CloneR™合用提高单细胞的存活率。

• 流程兼容，无缝对接。与我们已建立好的基因组编辑和分化方案完全兼容。

稳定的pH值和稳定化的组分（包括FGF2）

图1. mTeSR™ Plus在Weekend-Free的方案下维持了最适宜的pH水平

培养着hPSCs的mTeSR™ Plus的pH高于接种相似密度hPSCs的mTeSR™1，以及同类可使用灵活换液流程的hPSC培养基。培养72小时后测量pH值和细胞数量（72h内不换液）。显示的细胞数量范围代表在一个传代中观察到的不同细胞密度。这表明使用mTeSR™ Plus在日常维持培养期间的任何时间都可以跳过2天换液，同时保持pH值高于7.0。注意：培养物在72小时前进行双倍换液，72h内不换液，细胞数量来自6孔板的一个孔。

图2. mTeSR™ Plus在Weekend-Free的方案下维持了稳定的FGF2的水平

37°C培养72h，mTeSR™ Plus中的FGF2依旧维持高水平，使用ELISA检测。
 

测试有效

为了测试mTeSR™ Plus的性能极限，并确保我们的培养基在严苛的标准下保持细胞质量，以下部分的mTeSR™ Plus测试报告内容是在大大减少换液次数的情况（restricted流程）下完成的，如下所示。

更快的生长速率和形态

图3. 使用mTeSR™ Plus，观察到更大的克隆

上图显示传代超过10代，使用mTeSR™1（每日换液）或mTeSR™ Plus（restricted feeds）和Corning® Matrigel®上培养的人ES（H1和H9）和iPS（STiPS-M001和WLS-1C）细胞每代的平均克隆大小 ± SEM。大小为在传代时测量的代表性克隆的直径。请注意，此数据为7天传代间隔，如使用较短的传代间隔，则克隆大小会更小。

图4. mTeSR™ Plus可培养更多数量的细胞

使用mTeSR™1或mTeSR™ Plus在Corning® Matrigel®基质上培养的人类ES（H9）细胞检测7天生长曲线，每天换液或restricted换液流程。每孔接种20,000个细胞，在6孔板中使用团块传代，每天进行复孔细胞计数。

 

常见问题

Q：是否需要每天进行换液？

A：不需要！如需省略一天（48小时），我们建议照常进行“单一换液”（例如，6孔板每孔2 mL）。如需省略2天（72小时），执行“加倍换液”（例如，6孔板的每孔4 mL）。当然，每天仍然可以使用mTeSR™ Plus进行换液 - 这完全取决于您所希望的时间表。

Q：可以直接使用mTeSR™ Plus解冻细胞吗？

A：先前在mTeSR™1中维持的冷冻保存的hPSC可以直接用mTeSR™ Plus解冻细胞，无需额外的适应步骤。当使用mTeSR™ Plus时，您可能会看到冷冻保存的hPSCs的恢复率提高。

Q：如何使用mTeSR™ Plus生成克隆hPSC细胞系？

A：配合使用CloneR™（产品号＃05888）以显着提高hPSC的克隆效率。当以低密度接种细胞时，建议将CloneR™与mTeSR™ Plus一起使用。如果每孔接种多个细胞以获得克隆，我们建议以25个细胞/cm2的最大密度接种，以防止产生弥散克隆。我们建议在加入4天后从mTeSR™ Plus中去除CloneR™，因为在此持续时间内足以进行稳健的克隆生长/发育。有关克隆hPSC细胞系衍生的详细实验流程，请参阅www.stemcell.com/cloner上关于CloneR™产品信息表。

Q：mTeSR™ Plus会有cGMP版本吗？

A：mTeSR™ Plus已在我们的GMP生产中列入优先级别，并将在不久的将来根据CFR 820的cGMP质量管理体系生产。请注意2019年底之前有关此更改的通知。目前，mTeSR™ Plus将在符合ISO 13485，医疗器械认证的质量管理体系下生产。