大鼠血小板活化因子（PAF）ELISA试剂盒

供应商 ：仕诺达

库存 ：888

样本 ：血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本

标记物 ：大鼠血小板活化因子

适应物种 ：大鼠

应用 ：高校，中科院，研发公司

检测方法 ：ELISA

检测限 ：75 pg/mL – 2400 pg/mL

规格 ：48T

大鼠血小板活化因子（PAF）ELISA试剂盒
本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中大鼠血小板活化因子（PAF）的含量

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l 有效期：6个月
l 保存条件：2-8℃
  
实验原理
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被大鼠血小板活化因子（PAF）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的大鼠血小板活化因子（PAF）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。
 
样本处理及要求
1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。
 
需要而未提供的试剂和器材
1. 酶标仪（450nm）
2. 高精度加样器及枪头：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒温箱
4. 蒸馏水或去离子水
 
试剂盒组成
  备注：
1.  标准品浓度依次为：2400、1200、600、300、150、75 pg/mL
2.  经过大量正常标本检验，标本的正常浓度值均在试剂盒提供的检测范围内，实验过程中直接取50μL样本上样即可。当有部分样本值超过最大标准品浓度时，可用样本稀释液将标本进行适当稀释后再进行实验。
 
注意事项
1. 严格按照规定的时间和温度进行温育以保证准确结果。所有试剂都必须在使用前达到室温20-25℃。使用后立即冷藏保存试剂。
2. 洗板不正确可以导致不准确的结果。在加入底物前确保尽量吸干孔内液体。温育过程中不要让微孔干燥掉。
3. 消除板底残留的液体和手指印，否则影响OD值。
4. 底物显色液应呈无色或很浅的颜色，已经变蓝的底物液不能使用。
5. 避免试剂和标本的交叉污染以免造成错误结果。
6. 在储存和温育时避免强光直接照射。
7. 平衡至室温后再打开密封袋以防水滴凝聚在冷板条上。
8. 任何反应试剂不能接触漂白溶剂或漂白溶剂所散发的强烈气体。任何漂白成分都会破坏试剂盒中反应试剂的生物活性。
9. 不能使用过期产品。
10. 如果可能传播疾病，所有的样品都应管理好，按照规定的程序处理样品和检测装置。
 
试剂准备
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。
20×洗涤缓冲液的稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
 
操作步骤
1.  从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.  设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.  样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.  除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.  弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。
 
实验结果计算
以所测标准品的OD值为横坐标，标准品的浓度值为纵坐标，在坐标纸上或用相关软件绘制标准曲线，并得到直线回归方程，将样品的OD值代入方程，计算出样品的浓度。
 
试剂盒性能
1.  检测范围：75 pg/mL – 2400 pg/mL。
2.  灵敏度：最低检测浓度小于10 pg/mL。
3.  特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4.  重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。
滁州仕诺达生物科技有限公司（Chuzhou shinuoda Biological Technology Co., Ltd.）是一家以技术开发、转让、销售及咨询服务为一体的生物科技有限公司，公司主要研发销售生物试剂，为全球科研客户提供优质的产品和技术服务。 公司主营产品包括：ELISA试剂盒、动物血制品、染色液、试剂、抑制剂、酶相关试剂以及仪器设备等 经销品牌：Thermo Fisher Scientific、CST、abcam、santa cruz、sigma、Corning、Axygen、NEB、Novus、BD、R&D、阿拉丁（未提及品牌，本公司也可以代买） 公司以“产品质量第一，服务至上”为企业宗旨，秉承友好共赢的合作理念，立志给科研界老师提供我们力所能及的帮助。如果您对我公司的产品及服务有兴趣，期待您给我们个机会在线留言或者来电咨询。