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库存 :57
英文名 :Electron transport chain Complex I assay kit
CAS号 :详见说明书
保质期 :详见说明书
供应商 :上海西格
保存条件 :低温冷藏
规格 :20管/10样
中文名称:线粒体呼吸链复合物I试剂盒(NADH-辅酶Q还原酶)英文名称:Electron transport chain Complex I assay kit
产品规格:20管/10样
发货周期:1~3天
检测指标:线粒体呼吸链复合物I;NADH-辅酶Q还原酶
线粒体呼吸链复合物I(NADH-辅酶Q 还原酶)活性比色法定量检测试剂是一种旨在使用合成辅酶Q 同功类似物和特异性抑制剂,通过反应系统测定样品中还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)氧化后峰值的降低,即采用比色法测定样品中酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适合于各种纯化线粒体样品(动物、人体、酵母)以及细胞或组织裂解悬液样品的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)-辅酶Q 还原酶的特异性活性检测。其用于衰老、能量代谢、蛋白组学、病理生理学、神经病变等研究。产品不含污染性蛋白酶,严格无菌,即到即用,操作简捷,性能稳定,反应优化,检测敏感。
线粒体呼吸链复合物I,通常称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸辅酶Q还原酶(reduced nicotinamide adeninedinucleotide coenzyme Q reductase;NADH-CoQ reductase),又称为还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶(reduced nicotinamide adenine dinucleotide dehydrogenase;NADH dehydrogenase),是线粒体电子传递链中大的结构成分:含有30至40多个多肽结构。其特征性的酶活性是鱼藤酮敏感的NADH-辅酶Q还原酶(NADH:Q Reductase)。复合物I催化线粒体内电子由供体NADH传递到内膜上辅酶Q受体(泛醌;ubiquinone)的能量转移反应,为整个呼吸链反应系统的第一步。基于辅酶Q底物,在鱼藤酮存在与否的情况下,通过NADH-辅酶Q还原酶的催化,转化成还原型泛醌(CoQH2),同时还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)转化为氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamideadenine dinucleotide;NAD),在分光光度仪下产生吸收峰值的变化(340nm 波长),由此定量测定NADH-辅酶Q还原酶的特异活性。
保存方式
-20℃冰箱保存,避免反复冻融;反应液(Reagent B)含有毒性物质,避免直接用手接触;反应液(Reagent B)和底物液(Reagent D),避免光照,有效保证6月。
试剂盒组份:
缓冲液(Reagent A) 20 毫升
反应液(Reagent B) 2.5 毫升
阴性液(Reagent C) 2 毫升
底物液(Reagent D) 500 微升
专性液(Reagent E) 200 微升
线粒体呼吸链复合物I试剂盒(NADH-辅酶Q还原酶)产品特点:本产品仅供科研
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方,将溶胶和结合两种功能统一,因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况,节省了需购买多种试剂盒的费用,
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果,大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
培养细胞和冰冻切片:
准备工作:缓冲液的配备
3%柠檬酸——100ml 蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7·H2O)3g,pH2.0 左右。
2×SSC——1000ml 蒸馏水中加氯化钠 17.6g,柠檬酸三钠(C6H5O7Na3·2H2O,分子量 294)8.8g。
0.5×SSC——300ml 蒸馏水加 100ml 2×SSC 即可。
0.2×SSC——270ml 蒸馏水加 30ml 2×SSC 即可。
20%甘油——20ml 甘油加 80ml 蒸馏水即可。
0.5 M PBS——1000ml 蒸馏水加氯化钠 30g,Na2HPO4·12H2O 6g,NaH2PO4·2H2O 0.4g,PH7.2-7.6。
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线粒体呼吸链复合物I试剂盒(NADH-辅酶Q还原酶)注意事项:
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。本产品仅供科研
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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