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库存 :25
英文名 :SP Kit(Rabbit)
CAS号 :详见说明书
保质期 :详见说明书
供应商 :上海西格
保存条件 :低温冷藏
规格 :3ml|6ml|18ml|110ml
中文名称:免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)英文名称:SP Kit(Rabbit)
产品规格:3ml|6ml|18ml|110ml
发货周期:1~3天
本试剂盒适合于一抗为兔IgG的免疫组化实验DAB显色。SP法检测试剂盒是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的,用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质,同亲和素一样,对生物素有极高的亲和力,亲和素是一个碱性蛋白质(PI=10),经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性,对组织和细胞的非特异吸附很低,因此基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。
保存:如果长时间不使用,请将所有试剂存放于-20℃,如经常使用,可将封闭液,3%H2O2和20×DAB显色液B存放于2-8℃以方便使用。
操作步骤(以石蜡切片为例):
1.切片常规脱蜡至水(三次二甲苯,三次乙醇)。
2.3%H2O2室温处理5-10分钟以灭活内源性酶。蒸馏水洗3次。
3.可选步聚:
a、热修复抗原,将切片浸入0.01M柠檬酸钠缓冲液(PH6.0),电炉或微波炉加热至沸腾后断电,间隔5~10分钟后,反复1~2次。冷却后PBS(pH7.2-7.6)洗涤1~2次。
b、酶消化,滴加消化液,37℃10分钟,PBS(pH7.2-7.4)洗涤2~3次。
c、跳过此步,直接进入下一步。
4.滴加封闭液,室温20分钟。甩去多余液体,免洗。
5.用稀释液将一抗按一定比例稀释(稀释后的一抗4℃可保存一周),也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃孵育1小时左右或20℃2小时左右,也可4℃过夜。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。(一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说,阳性染色强度不够时,可提高一抗浓度和延长孵育时间;背景过高时,可降低一抗浓度和缩短孵育时间。)
6.根据用量,用稀释液将生物素-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl生物素-羊抗兔IgG浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素-羊抗兔IgG工作液,20-37℃孵育30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤3次,每次2分钟。
7.根据使用量,用稀释液将链酶亲和素-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl链酶亲和素-POD浓缩液混匀,此工作液4℃可保存一周)。滴加链酶亲和素-POD工作液,20-37℃,30分钟。PBS(pH7.2-7.4)洗涤4次,每次5分钟。
8.DAB显色:根据用量,用PBS(pH7.2-7.4)配制,按1mlPBS加入50μl 20×DAB显色液A,加入50μl 20×DAB显色液B。充分混匀后滴加到切片上。室温显色,镜下控制反应时间,一般在5-30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
9.苏木素轻度复染。脱水,透明,封片。显微镜观察。
对于细胞爬片,固定后,PBS漂洗两次,再用0.5% Triton X-100室温孵育20分钟,PBS漂洗两次,3%H2O2处理15分钟;PBS漂洗两次,接上述第4步。
对于冰冻切片,固定后,PBS漂洗两次,接上述第二步。
注意事项:
如果染色背景过高,在SP反应之后,DAB显色之前,用加有0.01-0.02% TWEEN-20的PBST(pH7.2-7.4)洗涤切片4次,PBS洗2次,然后DAB显色。
免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)产品特点:本产品仅供科研
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方,将溶胶和结合两种功能统一,因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况,节省了需购买多种试剂盒的费用,
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果,大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
培养细胞和冰冻切片:
准备工作:缓冲液的配备
3%柠檬酸——100ml 蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7·H2O)3g,pH2.0 左右。
2×SSC——1000ml 蒸馏水中加氯化钠 17.6g,柠檬酸三钠(C6H5O7Na3·2H2O,分子量 294)8.8g。
0.5×SSC——300ml 蒸馏水加 100ml 2×SSC 即可。
0.2×SSC——270ml 蒸馏水加 30ml 2×SSC 即可。
20%甘油——20ml 甘油加 80ml 蒸馏水即可。
0.5 M PBS——1000ml 蒸馏水加氯化钠 30g,Na2HPO4·12H2O 6g,NaH2PO4·2H2O 0.4g,PH7.2-7.6。
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免疫组化SP法检测试剂盒(兔IgG)注意事项:
尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响,但为取得良好的使用效果,3-6个月内推荐4℃保存,并适当注意避免反复冻融。
如果有细菌或真菌污染,会严重影响检测效果。
染色后宜尽快检测,时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
如果细胞收集过程中使用了胰酶,需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC,导致染色失败。
荧光物质均易发生淬灭,在进行荧光观察时,尽量缩短观察时间,同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
用于流式细胞仪检测时,如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞,并且通过调整相关设置和参数也无法改善,可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测,这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。本产品仅供科研
需自备PBS。
本产品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
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