Protein A/G免疫沉淀磁珠试剂盒

库存 ：28

英文名 ：Protein A/G Immunoprecipitation Kit

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海西格

保存条件 ：低温冷藏

规格 ：20次/100次

Protein A/G免疫沉淀磁珠试剂盒产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用，
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。本产品仅供科研
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。

中文名称：Protein A/G免疫沉淀磁珠试剂盒
英文名称：Protein A/G Immunoprecipitation Kit
产品规格：20次/100次
发货周期：1～3天
产品简介：
Protein A/G Matrix免疫沉淀磁珠及试剂盒系列产品是利用纳米表面技术使Protein A/G高密度定向包被到超顺磁性微球表面，与当前国际免疫磁珠市场上同类产品相比，该产品具有更多的抗体结合位点，磁珠使用量更少，非特异性结合率低，可便捷高效地进行免疫沉淀实验。每毫升免疫沉淀磁珠结合Human IgG的能力可达到300 μg以上，单个沉淀反应仅需25 μL磁珠即可完成检测。微米级磁珠提供的超大比表面积，大幅缩短抗体与抗原吸附所需的平衡时间，15 min内即可完成抗体吸附过程，30 min内完成抗原沉淀操作。简短的操作时间避免长时间操作造成目标蛋白水解，保证了目标蛋白的活性及蛋白复合物的完整性。
免疫沉淀磁珠试剂盒配有经过优化预制的缓冲液，为免疫沉淀实验提供了佳的反应条件，增强了免疫沉淀实验的稳定性。
本产品可广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中抗原的免疫沉淀反应。操作者可以参考本操作说明书，附表1的数据了解不同种属来源及亚型的抗体与Protein A磁珠、Protein A/G的结合能力。
储存条件：2～8℃保存
保存期：1年
注：磁珠结合Human IgG能力(Antibody Capacity)分别为：Protein A：0.4～0.5 mg/mL; Protein A/G：0.5～0.6 mg/mL
操作流程：
1. 抗原样品制备：本操作说明书提供以下四种样品处理方法，建议您根据不同来源的抗原样品选择适当的方式进行预处理，使待检测抗原释放至样品溶液中。
血清样品处理：若目标蛋白丰度较高，建议用结合缓冲液(②)稀释血清样品至目标蛋白终浓度为10～100 μg/mL，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
悬浮细胞样品处理：离心收集细胞(4℃，500 g，10 min)，弃上清后称重，按每毫克细胞50 μL的比例用1× PBS(③)洗涤2次；按每毫克细胞5～10 μL 的比例加入结合缓冲液(②)，同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM 的PMSF)，混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液(4℃,14000 g,10 min)，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
贴壁细胞样品处理：移去培养基，按每1.0×105个细胞150 μL的比例用1×PBS(③)洗涤两次；用细胞刮棒刮脱细胞，收集至1.5 mL EP管内，按每1.0×105个细胞20～30 μL 的比例加入结合缓冲液(②)，同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM的PMSF)，混匀后置于冰上处理10 min；离心收集上清液(4℃，14000 g，10 min)，置于冰上备用(或置于-20℃长期保存)。
大肠杆菌样品处理：离心收集大肠杆菌(4℃，12000 g，2 min)，弃上清后称重，按每克(湿重)菌体 10 mL的比例用1×PBS(③)洗涤2次；按每克(湿重)菌体5～10 mL的比例加入结合缓冲液(②)，同时加入蛋白酶抑制剂(如终浓度为1 mM 的PMSF)，重悬菌体，超声裂解细胞，离心收集上清(4℃，17000 g，10 min)。
2. 磁珠预处理：将免疫沉淀磁珠(①)漩涡振荡1 min，使磁珠充分振荡重悬；取25～50 μL磁珠悬液置 于1.5 mL EP管中。加入200 μL 结合缓冲液(②)洗涤，进行磁性分离［将EP管放置于磁性分离器(⑦)上，使磁珠被吸附在管壁至溶液澄清；该操作描述以下省略］，弃上清液，从磁性分离器上取下EP管，重复洗涤一次。后加入200 μL 结合缓冲液(②)重悬磁珠以备用。
3. 抗体结合反应：
抗体工作液的制备：用结合缓冲液(②)稀释抗体样品，配制成终浓度为5～50 μg/mL抗体工作液，置于冰上备用。
抗体吸附：将步骤2预处理的磁珠悬液进行磁性分离，弃上清液；加入200 μL抗体工作液，迅速重悬后在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管，15 min后进行磁性分离，收集上清液置于冰上以备后续检测。
洗涤：向EP管中加入200 μL 结合缓冲液(②)洗涤，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体复合物均匀分散，然后进行磁性分离，弃上清液，从磁性分离器上取下EP管。重复以上洗涤操作一次。
4. 抗体交联反应 (备选)：如操作者需要将抗体和目标抗原复合物共同洗脱，请忽略本步骤，进行步骤5。
本步骤适用于操作者需要单独洗脱目标抗原的试验，推荐使用BS3(Thermo Scientific，Cat. #21580)作为交联剂，相关实验请参照该试剂的操作说明。
5. 抗原沉淀反应
抗原吸附：加入200 μL步骤1中制备的抗原样品，用移液器轻轻吹打使抗原与磁珠-抗体复合物均匀分散。在室温下置于翻转混合仪或者手工轻轻翻转EP管10 min，使抗原与抗体充分结合，如结合力较弱则可在室温下反应1 h或者在4℃下反应过夜。
洗涤与转移：将上述完成抗原吸附的磁珠-抗体-抗原复合物进行磁性分离，收集上清液置于冰上以备后续检测。向EP管中加入200 μL洗涤缓冲液(④)洗涤，用移液器轻轻吹打使磁珠-抗体-抗原复合物均匀分散，然后进行磁性分离，弃上清液；从磁性分离器上取下EP管，再重复洗涤两次。后加入200 μL 洗涤缓冲液(④)，用移液器将磁珠-抗体-抗原复合物悬液转移至新的1.5 mL EP管中*，并执行磁性分离，移弃上清。
(*注：抗原洗脱前务必将磁珠转移到新的EP管，避免将管壁上原有的非特异性吸附蛋白一起洗脱。)
6. 抗原洗脱：本操作说明书提供以下两种抗原洗脱方案，操作者可根据后期检测的需要选择不同的抗原洗脱方法。
变性洗脱法：此法洗脱的样品适用于SDS-PAGE检测。从磁性分离器上取下EP管，向其中加入25 μL 1×SDS-PAGE Loading Buffer(自备)混合均匀，95℃加热5 min。然后执行磁性分离［也可以使用离心的方式(室温下13000 g，10 min)］收集上清液进行SDS-PAGE检测。
非变性洗脱法：此方法洗脱的样品保持原有的生物活性，可用于后期功能分析。从磁性分离器上取下EP管，向其中加入20 μL洗脱缓冲液(⑤)混合均匀，室温孵育10 min。然后执行磁性分离［也可以使用离心的方式(4℃，13000 g,10 min)］，收集上清液至新的EP管，并立即加入1.0 μL中和缓冲液(⑥)将洗脱产物pH调节至中性，用于后期功能分析。
注意事项：
1. 进行免疫沉淀操作之前，请务必认真阅读本操作说明书。
2. 本产品须与磁性分离器配套使用。
3. 磁珠使用前应充分振荡均匀。
Protein A/G免疫沉淀磁珠试剂盒注意事项：
     尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
以下是公司正在热销的产品：
BEL-7404(人肝癌细胞) 5×106cells/瓶×2脱水穿心莲内酯(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Dehydroandrographolide
CTSC Others Human 人 CTSC / DPPI 人细胞裂解液 (阳性对照) 脱水穿心莲内酯琥珀酸半酯(标准品)质量规格：HPLC≥99%，标准品Dehydroandrographolide succinate
中国仓鼠卵巢细胞(亚系克隆);DUKXB11 carrying pDEF202-hTPO-P1脱水羊藿素(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品Anhydroicaritin
IL1R1 Others Mouse 小鼠 IL1R1 / CD121a 人细胞裂解液 (阳性对照) 脱氧野尻霉素(标准品)质量规格：HPLC≥98%，标准品1-Deoxynojirimycin
Jurkat(悬浮) 急性T细胞白血病土大黄苷(标准品)质量规格：HPLC≥98%,标准品Rhapontin
AXL Others Human 人 Axl Kinase 人细胞裂解液 (阳性对照) 9-(2-羟乙基)腺嘌呤9-(2-Hydroxyethyl)adenine质量规格：美国进口
脐动脉平滑肌细胞Many types of cells包装：5 × 105方(1ml)E-64d,蛋白酶抑制剂,阿洛司他丁E64d,E-64d质量规格：>98%,BR
EFNA1 Others Rat 大鼠 Ephrin-A1 / EFNA1 人细胞裂解液 (阳性对照) 2’-脱氧胞苷-5‘-1酸二钠盐dCMP,2Na质量规格：>98%，BR
大鼠输尿管上皮细胞完全培养基 100mLdAMP;2’-脱氧腺苷-5‘-单1酸2'-Deoxyadenosine 5'-monophosphate质量规格：>99%,BR
OKT 11杂交瘤细胞抗CD2 OKT 11 hybridoma cells against CD2 IMDM培养基(GIBCO)+20%FBS黄素腺嘌呤二核苷酸二钠盐FAD-Na2质量规格：BR,罗氏进分
人脑血管周细胞裂解物HBVCL盐酸壮观霉素shēng huà shì jì容量：25克
CD2 Others Cynomolgus 食蟹猴 CD2 人细胞裂解液 (阳性对照) 2-溴芴 2-Bromofluorqnq 1133-80-8
人T细胞白血病细胞;HuT 78盐酸脲，英文名或英文缩写：Semicarbazide xy7nochloride，级别：实习级，98%，规格：100克
tTA基因修饰的小鼠胰腺癌细胞(B类);Pan02-CAG-tTA-3E6 木瓜蛋白酶(含100mL酶解缓冲液) 10mLNADGN-乙酰-D-基葡萄糖高级
WM35, 人色素瘤细胞 Human(琼脂粉-细菌培养级)
Protein A/G免疫沉淀磁珠试剂盒Bowes Melanoma细胞，色素瘤细胞 人原髓细胞白血病细胞,AL7P/HL-60R细胞 人结直肠腺癌细胞;HT-29DNAMarkerⅢ25克
A172(人脑胶质瘤细胞) 5×106cells/瓶×2D(+)-密二糖一水 》99.0% 6-O-cLPHc-D-GcLcCTOPYRcNOSYL-D-GLUCOSq MONOHYDRcTq 66009-10-7
IL8 Others Human 人 IL-8 (aa 1-77) 人细胞裂解液 (阳性对照) A.C.Eformide毛细管电泳级甲先胺测序级50ML1975-2-7Frozen
非洲绿猴肾细胞;VERO75cm2三角斜口细胞培养瓶shēng huà shì jì容量：25克
BTK Others Human 人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照) Fibrinogen 250mg/1g/5g Sigma F8630
本产品仅供科研培养细胞和冰冻切片：
准备工作：缓冲液的配备
3%柠檬酸——100ml 蒸馏水中加柠檬酸(C6H8O7·H2O)3g,pH2.0 左右。
2×SSC——1000ml 蒸馏水中加氯化钠 17.6g，柠檬酸三钠(C6H5O7Na3·2H2O，分子量 294)8.8g。
0.5×SSC——300ml 蒸馏水加 100ml 2×SSC 即可。
0.2×SSC——270ml 蒸馏水加 30ml 2×SSC 即可。
20%甘油——20ml 甘油加 80ml 蒸馏水即可。
0.5 M PBS——1000ml 蒸馏水加氯化钠 30g,Na2HPO4·12H2O 6g,NaH2PO4·2H2O 0.4g,PH7.2-7.6。