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文献和实验
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库存 :20
英文名 :Porcine rotavirus group E
保质期 :一年
供应商 :上海信裕生物科技有限公司
保存条件 :-20℃
规格 :50次
猪轮状病毒D群RT-LAMP试剂盒
Porcine rotavirus group E
产品及特点:
Porcine rotavirus group E
LAMP是一种新型核酸扩增技术,采用4或6条能够识别目的基因上的6个特异区域的引物,依赖于Bst DNA聚合酶的强链置换活性,在30~60分钟内DNA扩增可达109~1010倍。 LAMP检测方法分为多种,包括染料法、浊度法、电泳法以及我司最新开发的TaqMan荧光探针法。我司推出基于LAMP常用检测方法的冻干LAMP检测通用试剂盒,该系列产品为冻干制品,相对于市面上的液体型产品更加稳定,灵敏度更高,操作更加方便,通常在30min内完成检测。
LAMP变色扩增试剂盒包括:冻干LAMP-HNB变色扩增试剂盒、冻干LAMP橙绿变色扩增试剂盒、冻干LAMP浊度扩增试剂盒和冻干LAMP-TaqMan扩增试剂盒。其中 羟基萘酚蓝(HNB)是一种金属离子指示剂,HNB与镁离子结合使得反应体系初始颜色为紫罗兰色,随着反应的进行,Mg2+与析出的焦磷酸根离子反应生成焦磷酸镁沉淀,羟基萘酚蓝失去了镁离子使得体系颜色变为天蓝色,而未反应的体系则仍保持着紫罗兰色 ;而橙绿变色染料(OG Dye)则可与LAMP扩增产物结合成明显的肉眼可见的荧光绿色,阴性反应则为橙色;浊度法则是由浊度仪检测或肉眼观察LAMP剧烈反应产生的焦磷酸镁沉淀而判断反应结果;而LAMP-TaqMan则是由荧光检测仪器实时分析反应而判读结果。
产品名称 | 方法 | 规格 | 价格 |
猪轮状病毒D群LAMP试剂盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
猪轮状病毒D群PCR试剂盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
猪轮状病毒D群染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
猪轮状病毒D群探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 | 50次 | 3490元 |
1. 即开即用的2×LAMP MagicMix,A型含有红色电泳示踪剂,扩增后可以直接上样,不需要上样液。
2. 高特异性,由于同时使用4-6条特异引物,所以特异性比PCR 更高。
3. 高扩增效率,扩增效率可达到10E9-10E10,比PCR灵敏一个数量级,可检测到单拷贝的DNA分子。
4. 65℃左右等温扩增,可以不需要贵重的热循环仪。
5. 即开即用,包含了除引物和模板DNA外的所有成份,十分方便。
6. 肉眼检测扩增结果,不需要昂贵的电泳、荧光PCR等仪器。
7. 本试剂盒足够50次20μL体系的LAMP扩增。
8. 提供扩增对照,便于在遇到困难时分析原因。
9. 本产品只能用于科研,不能用于临床。
规格及成分
注:本产品 A 型(100203A)中加入了专用示踪染料。
成份 | 编号 | 热封袋包装 |
2×LAMP MagicMix,含示踪染料 | A | 500 μL(绿色盖) |
LAMP 阳性对照模板-引物混合物 | B | 45 μL(黄色盖) |
使用手册 | C | 1份 |
成份 | 编号 | 热封袋包装 |
2×LAMP MagicMix,不含示踪染料 | A | 500 μL(绿色盖) |
LAMP 阳性对照模板-引物混合物 | B | 45 μL(黄色盖) |
使用手册 | C | 1份 |
自备试剂 :LAMP 模板、LAMP 引物、自备可见光染料
使用方法
1. 制备模板DNA:选用合适的方法制备模板DNA。
2. 配制自备的5×LAMP引物混合液。
先加超纯水或自备TE缓冲液将自备的下列6种(或4种)引物干粉稀释到母液浓度,然后在一新的离心管中按表中所列体积加入各种引物母液和超纯水,最后得到1mL的5×LAMP引物混合液,此混合液足够250次20μL体系的LAMP扩增。如果需要配制的5×LAMP引物混合液体积异于1mL,则各成分的用量请按比例调整。引物混合液可以在-20℃放置2年。
引物名称 | 母液浓度 | 加母液量 | 在 5×LAMP 引物混合液中的浓度 |
FIP 引物 | 100 μM | 80 μL | 8 μM |
BIP 引物 | 100 μM | 80 μL | 8 μM |
F3 引物 | 100 μM | 10 μL | 1 μM |
B3 引物 | 100 μM | 10 μL | 1 μM |
Loop F | 100 μM | 20 μL | 2 μM |
Loop B | 100 μM | 20 μL | 2 μM |
超纯水 | 780 μL | 如果没有 Loop 引物,则用水替代 | |
终体积 | 1 mL |
- 在冰上融化2×LAMP MagicMix,混匀,稍离心。如果有N个样品,则在N+2个反应管中加入以下组份:
成份 | 样品管 | LAMP阳性对照 | LAMP阴性对照 |
2×LAMP MagicMix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |
自备 5×LAMP 引物混合液 | 4 μL | -- | 4 μL |
自备模板 DNA | 1-100ng | -- | -- |
LAMP 阳性对照模板-引物混合物 | -- | 4 μL | -- |
补自备超纯水到 | 20 μL | 20 μL | 20 μL |
4. 混匀,置于63℃保温60分钟。如果是在PCR仪中保温,必须加热盖。如果用金属浴或水浴保温,没有热盖,必须覆盖50μL的石蜡油,否则保温期间反应体系的水分会蒸发,影响反应效率。
5. 产物取扩增产物5 μL直接上样(本产品A含有红色电泳示踪剂,不需要再加上样液,红色示踪剂的泳动速度相当于50bp的DNA)进行2-3%的琼脂糖凝胶电泳,可见LAMP特征性电泳图谱。
6. 结果分析:如果本试剂盒提供的阳性对照-引物混合物能够扩增而阴性对照不能扩出,则实验有效。如果阳性对照-引物混合物没有扩增出条带,则试剂盒的问题,请跟厂家联系。如果阴性对照(水作为模板)有扩增出条带,则说明LAMP样品或试剂有过去的扩增产物的污染,需要注意操作的规范性,如果不能解决,可以重新设计引物扩增新的靶片段。也可以使用不需要开盖的2×可视化LAMP MagicMix。
注意事项
1. 引物设计对成功扩增十分关键,尽量以保守区设计引物。
2. 引物至少包括F3/B3和FIP/BIP,加入环状引物F loop/B loop可以使反应速度大大提高。
3. 应优化引物序列、GC含量和尽量避免二级结构。
4. LAMP扩增具有特异性好、灵敏度高、时间快、不需要特殊仪器设备等优点。但太高的灵敏度使得其比普通 PCR 扩增更加容易污染导致假阳性。因此,必须高度重视扩增产物的污染。常规措施包括严格的实验分区、使用荧光定量等不开盖检测方法。实验室一旦遭到污染,很难去除,最好重新设计引物扩增新的靶片段。
5. 要确证扩增的为目标基因,可以使用特定的限制性酶切和/或Southern杂交。
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
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