HS Probe qPCR Mix探针法荧光定量PCR P2201-P2205
价格: ¥240 - 16000
产品详情
文献和实验
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库存 :大量
英文名 :HS Probe qPCR Mix
保质期 :2年
供应商 :东盛生物
保存条件 :-20℃
规格 :1ml/1ml×5/1ml×10/1ml×50/1ml×100
HS Probe qPCR MixCat. #:P2201,P2202,P2203,P2204,P2205
产品简介
HS Probe qPCR Mix是用于探针法实时定量PCR的2×浓缩预混液,使用时只需加入模板、引物和探针即可进行反应。本品含有类抗体技术修饰的热启动酶Hotstart Taq DNA聚合酶,配合东盛特制的Real Time PCR Buffer,不仅有效抑制引物二聚体和其他非特异性扩增,而且能够提高扩增效率,可以进行高灵敏度高特异性的PCR反应。本品在宽广的定量域内具有良好的线性关系,对靶基因定量准确、可信度高,重复性好。本品可搭配TaqMan等各类荧光探针使用,与常见定量PCR仪完美兼容,如ABI、Roche、Bio-Rad等。
产品组成
Component | P2201 | P2202 | P2203 | P2204 | P2205 |
2× HS Probe qPCR Mixa | 1 ml | 1 ml×5 | 1 ml×10 | 1 ml×50 | 1 ml×100 |
超纯水 | 1 ml | 1 ml×5 | - | - | - |
保存条件
HS Probe qPCR Mix -20℃保存2年,4℃可短期保存。
质量控制
纯度检测:经质量检测,产品不含脱氧核糖核酸内切酶、脱氧核糖核酸外切酶和核糖核酸酶污染。
功能检测:经不同来源的模板和引物检测,产品具有优秀的特异性、灵敏性及可重复性等。
应用举例
- 配制反应体系
Component | Volume | Final concentration |
DNA template[1] | 1-4 μl | Variable |
Forward primer (10 μM)[2] | 0.4 μl | 0.2 μM |
Reverse primer (10 μM)[2] | 0.4 μl | 0.2 μM |
2× HS Probe qPCR Mix | 10 μl | 1× |
Probe (10 μM)[3] | Variable | 0.1-0.5 μM |
ddH2O | Variable | - |
Total volume[4] | 20 μl | - |
[2] 引物终浓度建议范围:0.1-1.0 μM, 通常引物终浓度为0.2 μM效果较好。
[3] 使用探针的浓度与Real Time PCR扩增仪、探针种类和荧光标记物种类有关,使用时请参照相关说明。通常探针终浓度在0.1-0.5 μM之间。
[4] 建议总体积不小于10 μl,以免造成较大的加样误差。具体体积范围参考仪器说明。
注意:对于某些固定型号的仪器,需要添加ROX才能精确测定Ct值。由于ROX的使用体积较小,建议将ROX提前与qPCR Mix混匀使用。ROX用量参照具体仪器说明,下表仅供参考。
Instruments | ROX (100X) |
ABI PRISM 7000/ PRISM 7700/ 7300/ 7900HT/ Step One/ Step One Plus/ GeneAmp 5700 | 1-2% (High ROX) |
ABI 7500/ 7500 Fast/ ViiA 7/ QuantStudio 6/7/12K Flex; Agilent Stratagene Mx3000P/ Mx3005P/ Mx4000 | 0.2% (Low ROX) |
Bio-Rad CFX96/ CFX384/ iQ/ iQ5; MJ Research Opticon 2/ Chromo 4; Roche LightCycler 480/ 96; Corbett Rotor Gene G/ Q/ 3000/ 6000; Thermo PikoReal 96; Eppendorf MasterCycler ep realplex; Cepheid Smart Cycler | No ROX |
- 设定反应程序进行qPCR反应
Stage | Temperature | Time | Cycle |
Initial denaturation | 95℃ | 3 min | 1 |
Denaturation | 95℃ | 10 sec | 40 |
Annealing & Extension[1] | 60℃ | 30 sec |
若反应效果不佳,建议采用三步法扩增程序。
经典三步法程序示例如下:
Stage | Temperature | Time | Cycle |
Initial denaturation | 95℃ | 3 min | 1 |
Denaturation | 95℃ | 10 sec | 40 |
Annealing[1] | 60℃ | 15 sec | |
Extension | 72℃ | 20 sec |
- 分析结果
注意事项
使用前Mix需要完全解冻,充分混匀。尽量避免多次反复冻融。短期使用可保存于4℃。
‚ 将(n+x)份反应液混匀后再分注到n个单管中,可降低加样误差。(n为重复次数,x为损耗量,一般为n的1/10)
ƒ ABI的定量仪器大部分需要ROX校正管间差异,Bio-Rad的定量仪器不需要ROX校正。具体仪器请参照其使用说明。
„ 轻轻混匀反应液,避免产生气泡,气泡会干扰荧光检测。可瞬时离心去除气泡。
… 引物的特异性、用量以及退火温度是影响实验结果的重要因素。务必设计特异性好的引物,随实验结果适当调整引物用量(0.1 μM-1.0 μM)——特异性较差时减少引物用量,或以3℃为增量提高退火温度,扩增效率较低时增加引物用量。
† DNA模板的量应小于500 ng/反应,过高的模板量会引起非特异性扩增。应根据模板类型与基因表达量适当调整用量。
‡ 各类探针应参照相应的指南进行设计,并根据所用扩增仪类型、探针种类和荧光标记物种类等调整用量。
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名称 | 货号 | 规格 |
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