兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色)

库存 ：35

英文名 ：SABC KitFITC(POD)(Rabbit IgG)

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海莼试

保存条件 ：-20℃，如经常使用，可将封闭液，稀释液，20×DAB显色液B和抗荧光衰减封片剂存放于2～8℃以方便使用。

规格 ：100T200T

注意事项：
1. 兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色) 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

参数规格:

产品名称	兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色)
英文名称	SABC KitFITC(POD)(Rabbit IgG)
货号	CS-X14314

中文名称：兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色)
英文名称：SABC Kit-FITC(POD)(Rabbit IgG)
产品规格：100T-200T
发货周期：1～3天
本试剂盒适合于一抗为兔IgG来源的免疫组化实验，DAB及FITC显色。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（PI=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC即StreptAvidin-Biotin Complex，SABC大约可形成一百个左右的过氧化物酶或者FITC和五十个左右的链霉亲和素所构成的复合物。大量的酶与FITC将保证SABC具有很高的敏感性。
保存：-20℃，如经常使用，可将封闭液，稀释液，20×DAB显色液B和抗荧光衰减封片剂存放于2～8℃以方便使用。
操作步骤（以石蜡切片热修复为例）：
1．切片常规脱蜡至水。3% H2O2室温5～10分钟以灭活内源性酶（如果FITC，可省掉此步）。蒸馏水洗3次。
2．热修复抗原：将切片浸入0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0），电炉或微波炉加热至沸腾后断电，间隔5～10分钟后，反复1～2次。冷却后PBS（pH7.2-7.6）洗涤1～2次。
3．滴加5% BSA封闭液，室温20分钟。甩去多余液体，免洗。
4．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗 4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗，37℃ 1小时孵育左右或20℃ 2小时左右，也可4℃过夜。PBS（pH7.2～7.4）洗涤3次，每次2分钟（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。一般来说，阳性染色强度不够时，可提高一抗浓度和延长孵育时间；背景过高时，可降低一抗浓度和缩短孵育时间）。
5．根据使用量，用稀释液将bio-羊抗兔IgG浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl bio-羊抗兔IgG浓缩液，混匀即成工作液，此工作液4℃可保存一周)。滴加生物素化羊抗兔IgG工作液，20～37℃处理30分钟。PBS（pH7.2～7.4）洗涤3次，每次2分钟。
  如果用荧光观察，请接步骤6、7，如果用DAB显色，请直接转至步骤8。
6．根据使用量，用稀释液将SABC-FITC浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl SABC-FITC浓缩液，混匀即成SABC-FITC工作液。此工作液4℃可保存一周)滴加SABC-FITC工作液，20～37℃，30分钟(避光)。PBS（pH7.2～7.4）洗涤4次，每次5分钟。
7．滴加抗荧光衰减封片剂封片。荧光显微镜观察。
8．根据使用量，用稀释液将SABC-POD浓缩液按1:100稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl SABC-POD浓缩液，混匀即成SABC-POD工作液。此工作液4℃可保存一周)，滴加SABC-POD工作液，20～37℃，30分钟。PBS（pH7.2～7.4）洗涤4次，每次5分钟。
9．DAB显色:根据用量，用PBS（pH7.2～7.4）配制，按1ml PBS加入50μl 20×DAB显色液A，加入50μl 20×DAB显色液B，混匀后加至切片。室温显色，镜下控制反应时间，一般在5～30分钟之间。蒸馏水洗涤终止反应。
10．苏木素轻度复染。脱水，透明，封片。显微镜观察。
对于细胞爬片：常规固定后，PBS漂洗两次，再用0.5% Txiton X-100室温20分钟，PBS漂洗两次，3% H2O2（如果用FITC，刚可省掉此步）处理15分钟；PBS漂洗两次，下接上面第4步。
对于冰冻切片：固定后，可用PBS漂洗两次，再接上面第二步。
注意事项：
1．如果用DAB染色背景过高，在SABC反应之后，DAB显色之前，用加有0.01～0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2～7.4）洗涤切片4次，PBS洗2次，然后DAB显色。
2．如果用FITC观察背景过高，在SABC反应之后，用加有0.01～0.02% TWEEN-20的PBST（pH7.2～7.4）洗涤切片4次，PBS洗涤2次，然后封片观察。
3．因为免疫组化指标众多，标本不一，此步骤仅作参考。
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用，
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
性成纤维细胞生长子(FGF2)检测试剂盒(学发光免疫分析法)　Homo sapiens (Human)
组织蛋白酶抑制子1(TIMP1)检测试剂盒(学发光免疫分析法)　Homo sapiens (Human)
组织蛋白酶抑制子1(TIMP1)检测试剂盒(学发光免疫分析法)　Mus musculus (Mouse)
组织蛋白酶抑制子1(TIMP1)检测试剂盒(学发光免疫分析法)　Rattus norvegicus (Rat)
质蛋白酶9(MMP9)检测试剂盒(学发光免疫分析法)　Mus musculus (Mouse)
表皮生长子(EGF)检测试剂盒(学发光免疫分析法)　Homo sapiens (Human)
表皮生长子(EGF)检测试剂盒(学发光免疫分析法)　Mus musculus (Mouse)
人丝狀血球凝集素(FHA)ELISA试剂盒规格：96T/48T    特价促销
人松弛肽/松弛素(RLN)ELISA试剂盒 规格：96T/48T    特价促销
人性成纤维细胞生长子1(aFGF1)ELISA试剂盒规格：96T/48T    特价促销
人性神经鞘脂酶(ASM)ELISA试剂盒规格：96T/48T    特价促销
人髓过物酶(MPO)ELISA试剂盒规格：96T/48T    特价促销
人髓过物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPOANCA IgG)ELISA试剂盒规格：96T/48T    特价促销
人髓脂性蛋白(MBP)ELISA试剂盒规格：96T/48T    特价促销人血管生成素受体Tie2(ANGRTie2)ELISA试剂盒   规格：96T/48T    特价促销
人血管生成素受体Tie1(ANGRTie1)ELISA试剂盒   规格：96T/48T    特价促销
人血管生成素4(ANG4)ELISA试剂盒   规格：96T/48T    特价促销
人血管生成素2(ANG2)ELISA试剂盒   规格：96T/48T    特价促销         Mouseneurofilamentprotein,NFELISAKit小鼠神经丝蛋白100340-200602
Mousesmallnuclearribonucleoprotein,snRNP/SmELISAKit小鼠抗小核糖核蛋白/Sm抗体100341-200702
Mouseserine/threonineproteinkinase,STKELISAKit小鼠丝氨/苏氨蛋白磷酶100342-200402
MouseLactateDehydrogenase,LDHELISAKit小鼠脱氢酶100343version":"10.1.0.7698"}')
兔源一抗免疫组化检测试剂盒(FITC荧光+DAB显色) LopinavirCDC123/C10orf7细胞分裂周期蛋白CDC123抗体ELISAKitforInterferonRegulatoryFactor5(IRF5)
CCDC16/zincfingerprotein830锌指蛋白830抗体ELISAKitforCytohesinInteractingProtein(CYTIP)
LoracarbefCDC20B细胞分裂周期蛋白20B抗体ELISAKitforB-CellLinkerProtein(BLNK)
LoracarbefL-Isomerccnb1ip1周期蛋白B1结合蛋白1抗体ELISAKitforB-LymphocyteChemoattractant1(BLC1)
CDC45L细胞分裂周期调控蛋白45抗体ELISAKitforGrowthRegulatedOncogeneBeta(GROb)
LoratadineCDCA2细胞分裂周期蛋白2抗体ELISAKitforGrowthRegulatedOncogeneGamma(GROg)
CEP152中心体蛋白152抗体ELISAKitforPhospholipaseCBeta3,PhosphoinositideSpecific(PLCb3)
CEP76中心体蛋白质76抗体ELISAKitforGlycophosphatidylinositol(GPI)
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。