免疫组化检测试剂盒(AP显色)(小鼠IgG)

库存 ：33

英文名 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海莼试

保存条件 ：-20℃

规格 ：100T200T

参数规格:

产品名称	免疫组化检测试剂盒(AP显色)(小鼠IgG)
英文名称	SABC KitAP(Mouse IgG)
货号	CS-X14312

中文名称：免疫组化检测试剂盒(AP显色)(小鼠IgG)
英文名称：SABC Kit-AP(Mouse IgG)
产品规格：100T-200T
发货周期：1～3天
本试剂盒适合于一抗为小鼠IgG的免疫组化实验AP显色。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素(StreptAvidin)是一种从链霉菌中提取的蛋白质，同亲和素一样，对生物素有极高的亲和力，亲和素是一个碱性蛋白质（IP=10），经改造后可以转变成中性蛋白质。链霉亲和素等电点接近中性，对组织和细胞的非特异吸附很低，基于链霉亲和素的免疫组化方法背景很低。SABC 即 StreptAvidin—Biotin Complex。
保存条件：-20℃
操作步骤（以石蜡切片为例，仅作参考）：
1．切片常规脱蜡至水(三次二甲苯，三次乙醇)。
2．可选步聚：
  a、热修复抗原，
  b、酶消化，
  c、跳过此步，直接进入下一步。
3．滴加 5%BSA 封闭液，室温 20分钟。甩去多余液体，不洗。
4．用稀释液将一抗按一定比例稀释（稀释后的一抗 4℃可保存一周），也可另行购买抗体稀释液。滴加稀释的一抗37℃ 1小时左右或20℃时2小时左右。也可4℃过夜。TBS（pH7.2-7.4）洗2分钟×3次。（一抗的稀释度、孵育时间和温度与染色强度、背景有直接关系。具体稀释度和孵育时间参考一抗说明书。）
5．根据用量，用稀释液将 Bio-羊抗小鼠 IgG 浓缩液按 1:100 稀释成工作液(1ml稀释液加入 10μl Bio-羊抗小鼠IgG浓缩液混匀。此工作液 4℃可保存一周)。滴加 Bio-羊抗小鼠 IgG 工作液，20-37℃ 30分钟。TBS（pH7.2-7.4） 洗2分钟×3次。
6．根据使用量，用稀释液将SABC-AP浓缩液按 1:100 稀释成工作液(1ml稀释液加入10μl SABC-AP浓缩液混匀。此工作液4℃可保存一周)。滴加 SABC-AP工作液，20-37℃，30分钟。TBS（pH7.2-7.4）洗 5分钟×4次。
7．根据用量，1ml AP缓冲液中加入40μl NBT溶液，混匀后再加入40μl BCIP溶液。此工作液现用现配。室温显色, 镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤终止反应。
  * 对于冰冻切片，固定后，TBS 漂洗两次，接上述第二步
注意事项：
如果染色背景过高，在SABC反应之后，AP显色之前，用加有 0.01～0.02% TWEEN-20的TBST（pH7.2-7.4）洗涤切片4次，TBS洗2次，然后AP显色。因为免疫组化指标众多，标本不一，本操作步骤仅作参考。

注意事项：
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。
产品特点：
1.免疫组化检测试剂盒(AP显色)(小鼠IgG) 离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用，
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。
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