过表达/干扰RNAi慢病毒包装服务

提供商 ：Hanbio汉恒生物

服务名称 ：慢病毒包装

规格 ：1ml

产品简介

       慢病毒（Lentivirus）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷1型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点，因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。

慢病毒特点：

●　感染范围广

　　慢病毒可有效感染分裂和非分裂细胞，适合几乎所有细胞系，如神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等。

●　可稳定表达

　　慢病毒可将外源基因整合到宿主细胞基因组上，不随着细胞的分裂传代而丢失，可实现目的基因的长时间稳定表达。

●　操作安全性高

　　慢病毒采用的是自失活复制缺陷型病毒株，保障操作安全

汉恒服务项目

●　常规基因过表达/干扰慢病毒包装

●　miRNA　sponge／antago慢病毒

●　circRNA /LncRNA过表达和干扰慢病毒

●　CRISPR/Cas9慢病毒定制

●　慢病毒现货

●　慢病毒稳定细胞株

 

 

整体实验流程

 

（一） 实验流程（1、2、3为并列步骤）

 

      1. 慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，采用PCR技术(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（cDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（coding sequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。

 

     2. 慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体。

 

     3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。

 

     4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒（两质粒包装系统），三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6 h 更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。

 

（二）流程图

 

 

 

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