超敏ECL化学发光即用型底物1.0

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英文名 ：详见说明书

保质期 ：一年有效

供应商 ：上海莼试

保存条件 ：4℃避光保存

规格 ：25ml×2/50ml×2/100ml×2/200ml×2/500ml×2

细胞生物学研究有以下几个方面。
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括。
①细胞核、染色体以及基因表达的研究。
②生物膜与细胞器的研究。
③细胞骨架体系的研究。
④细胞增殖及其调控。
⑤细胞分化及其调控。
⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡)。
⑦细胞的起源与进化。
⑧细胞工程。
中文名称：超敏ECL化学发光即用型底物1.0
英文名称：
产品规格：25ml×2/50ml×2/100ml×2/200ml×2/500ml×2
发货周期：1～3天
产品保存：4℃避光保存，一年有效。
产品规格：
100ml 工作液(可用于 10000cm2的膜)
溶液 A 500ml
溶液 B 500ml
产品说明：超敏 ECL 化学发光试剂盒，是一款具有超高灵敏度的化学发光(ECL)底物，可与二抗上耦连的辣根过氧化物酶发生化学反应，发出荧光，从而可以通过用×光片压片或CCD 成像仪检测样品,当底物与优化的抗体浓度和封闭缓冲液配合使用时，可检测到常规 ECL 底物无法检测的低丰度靶蛋白。
产品特点：
1.用于辣根过氧化物酶(HRP)的化学发光底物
2.使用适当的一抗和二抗时，可在 NC 膜或PVDF 膜上检测丰度为低皮克级的蛋白条带
3.所得信号的可定量检测范围跨越两个数量级
4.通过胶片或成像系统进行曝光，易于捕获图像
5.试剂盒组分能够在 4℃条件下稳定放置一年
7.配方经过优化，可适用于浓度极低的抗体检测重要产品信息：好的免疫印迹结果需要优化实验条件，包括样品量，凝胶类型，转移方法，膜类型，封闭剂，洗涤缓冲液，一抗浓度，二抗浓度和孵育时间等。
1.为获得最佳效果，在孵育步骤中使用摇床。
2.不要使用叠化钠作为缓冲液的防腐剂，因为它会抑制 HRP。
3.始终戴上手套或使用干净的塑料镊子。金属装置必须没有可见的生锈痕迹，这可能导致斑点和/或高背景。
4.工作液暴露在阳光下或任何其他强光下都可能损害工作液使用效果。
5.由于阻断剂与抗体的交叉反应性引起非特异性信号，所以实验测试对于确定每种蛋白质印迹系统的适当封闭剂是至关重要的。阻止缓冲区也会影响系统的灵敏度。
6.当使用抗生物素蛋白/生物素系统时，避免使用牛奶作为阻断剂，因为牛奶含有不同量的内源性生物素，导致高背景信号。
7.使用足够量的洗涤缓冲液，封闭缓冲液，抗体溶液和底物工作溶液来覆盖印迹并确保其永不变干。使用大的封闭和洗涤缓冲液体积可以使非特异性信号最小化。
8.将 Tween-20洗涤剂(终浓度为0.05-0.1%)加入到封闭缓冲液和所有稀释的抗体溶液中，以减少非特异性信号。
注意事项：
1.A 液和 B 液吸取过程中必须更换移液器枪头，避免相互污染失效。
2.A 液和 B 液混合为工作液后，需避免强氧化剂如次酸钠等对工作液的影响。
3.须确保试剂瓶干净，无微生物或其它试剂污染。
4.为了您的安全，请穿实验服并佩戴一次性手套。
需要材料：
NC 膜或PVDF 膜
X 射线胶片或成像系统
摇床
洗涤缓冲液：含有 0.05-0.1%吐温 20的洗涤液，PBS：10mM 酸钠，150mM NaCl，pH7.2 TBS：10mM Tris，150mM NaCl，pH7.4
特异性的一抗，用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释
HRP 标记的二抗，特异性针对一抗，用洗涤缓冲液或封闭缓冲液稀释
封闭液：洗涤缓冲液中 1-5%(w/ v)封闭剂(例如酪蛋白，BSA或脱脂奶粉)
注意：我们的ECL底物与所有封闭缓冲液兼容
使用说明：
1.室温封闭膜 60分钟，同时摇动。
2.去除封闭液并添加一抗。在室温振荡培养 1 小时或在 2-8℃过夜振荡。
3.将膜悬浮于清洗缓冲液中摇动 5分钟以上。更换清洗缓冲液至少 4-6次。增加洗涤缓冲液体积，洗涤次数和洗涤持续时间可能有助于使背景信号最小化。
4.在室温下孵育二抗 1 小时，同时摇动。
5.重复步骤 3，去除未结合的HRP 结合物。
注意：与 HRP 结合物孵育后，膜必须彻底清洗。
6.通过混合等量的检测试剂 A和 B 来制备底物工作溶液。每平方厘米膜使用 0.1mL 工作溶液。
7.在室温下用工作液孵育印迹膜 1-2分钟。
8.将印迹膜放在透明的保鲜膜或保护膜中。使用吸收性的纸巾去除多余的液体，小心地将气泡压出。
9.将印迹膜放在×光胶片或成像系统上显色。底物孵育后的30分钟内，发光最强烈。
注意事项：
    超敏ECL化学发光即用型底物1.0 尽管经测试Annexin V-FITC反复冻融5次对于其检测效果无显著影响，但为取得良好的使用效果，3-6个月内推荐4℃保存，并适当注意避免反复冻融。
      如果有细菌或真菌污染，会严重影响检测效果。
      染色后宜尽快检测，时间过长可能会导致凋亡或坏死细胞的数量增加。
      如果细胞收集过程中使用了胰酶，需注意设法去除残留的胰酶。残留的胰酶会消化并降解Annexin V-FITC，导致染色失败。
      荧光物质均易发生淬灭，在进行荧光观察时，尽量缩短观察时间，同时在操作和存放过程中也尽量注意避光保存。
      用于流式细胞仪检测时，如果发现Annexin V-FITC单独染色时出现了过多的PI假阳性细胞，并且通过调整相关设置和参数也无法改善，可以用PBS将Annexin V-FITC稀释3-10倍后再进行检测，这样通常可以有效减少假阳性的坏死细胞。
      需自备PBS。
      本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
      为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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细胞培养的优点：
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中，根据要求可始终保持细胞活力，并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况，包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件，可以根据实际需要进行人为的控制，同时，可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察，这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后，所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞，需要时，可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术：如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。