Western半干法转膜液(固体)(1×干粉)

库存 ：47

英文名 ：详见说明书

保质期 ：一年有效

供应商 ：上海莼试

保存条件 ：室温保存

规格 ：1包

操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) Western半干法转膜液(固体)(1×干粉) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。

参数规格:

产品名称	Western半干法转膜液(固体)(1×干粉)
英文名称	详见说明书
货号	CS-X13916

中文名称：Western半干法转膜液(固体)(1×干粉)
英文名称：
产品规格：1
发货周期：1～3天
产品保存：室温保存，一年有效。
产品简介：
Western 半干法转膜液是一种安全无毒的转膜液，没有使用剧毒的甲醇。配制 Western 半干法转膜液的方法非常便捷，不需要调节 pH值。本 Western 转膜液共 1 瓶，可以配制 1 升 Western 半干转膜液。
使用说明：
1．将 Western 转膜液的粉剂，倒入到一洁净的烧杯中，加入蒸馏水到约700 毫升，溶解。
2．加入 200 毫升无水乙醇，混匀。
3．定容到 1 升。混匀后即可使用，无需调节 pH 值。
注意事项：
1．配制好的半干法转膜液可室温或4℃保存。如果颜色变成浅棕色或黄褐色，应丢弃。
2．需使用分析纯级别及以上级别的乙醇。
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用，
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
7Nitroindole7吲哚6960425
CITRIC ACID TRINPROPYL ESTER柠檬三1587219
2Amino5nitrobenzophenone25二1775957
CHLOROPHOSPHONAZO III偶Ⅲ1914994
2Chlorobenzyl alcohol2苄17849386
Quinoline91225
Mildronate米屈肼76144815
2,6Pyridinedimethanol2,6二1195591
NBocLtertLeucineNBocL叔亮62965359
N,OBis(trimethylsilyl)acetamideN,O双三硅酰10416598
Glycidaldehyde diethylacetal环缩二13269777
4Methoxybenzyl bromide4溴苄2746250
5,6Dimethylbenzimidazole5,6二并咪唑582605
NCbzLTryptophanN苄羰L色7432215
Ethyl oxazole4carboxylate4噁唑羧23012148
Hemin　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
牛血红蛋白　含量：≥ 98%　规格：10mg/支
Hemoglobin, From Bovine Blood　含量：　规格：20mg/支
肝素　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
Heparin Sodium Salt　含量：　规格：20mg/支
N(2羟)N'2　含量：≥ 98%　规格：10mg/支
HEPES, Free Acid　含量：0.98　规格：10mg/支
辣根过物酶　含量：0.98　规格：10mg/支
Western半干法转膜液(固体)(1×干粉) 48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
AcebutololHydrochloride48T/96T进口、国产1620FluorouracilHPLC≥98%
48T/96T进口、国产1620HydroxypropylCelluloseHPLC≥98%
Acenocoumarol48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
AcepromazineMaleate48T/96T进口、国产1620MesnaHPLC≥98%
AcesulfamePotassium48T/96T进口、国产1620HPLC≥99%
Acetaminophen48T/96T进口、国产1620NaratriptanResolutionMixtureHPLC≥99%tauhuman人微管相关蛋白小鼠巨噬细胞炎性蛋白-3β(MIP-3β)原装、分装含量测定
GDNF人神经胶质细胞系衍化神经营养因子小鼠巨噬细胞炎性蛋白-3α(MIP-3α)原装、分装含量测定
BFGF人碱性成纤维细胞因子小鼠巨噬细胞炎性蛋白-2(MIP-2)原装、分装GC法鉴别
HGF人肝细胞生长因子小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β(MIP-1β)原装、分装含量测定
NE(Humen)人去小鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)原装、分装GC法含量测定
注意事项：
1. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。