BCA蛋白浓度测定试剂盒

库存 ：34

英文名 ：详见说明书

保质期 ：详见说明书

供应商 ：上海莼试

保存条件 ：详见说明书

规格 ：250次/500次/2500次

注意事项：
1. BCA蛋白浓度测定试剂盒 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物，操作时请采取防护措施，穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞，流式细胞仪检测时，细胞数量不以应低于1×105，，不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞，建议适用不含EDTA 的胰酶消化，如消化不当，可能引起假阳性，而用细胞刮子会造成细胞粘连成团，而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中，防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭，请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同，因而流式检测的荧光补偿也不同，因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照，进行荧光补偿的调节。

参数规格:

产品名称	BCA蛋白浓度测定试剂盒
英文名称	详见说明书
货号	CS-X13944

中文名称：BCA蛋白浓度测定试剂盒
英文名称：
产品规格：250次/500次/2500次
发货周期：1～3天
主要成份：
A 液 50ml
B 液 2.5ml
蛋白标准品 10ml(2mg/ml)
产品描述：应用试管法可以测量 25 管，微孔板法可以测量 250 孔。
产品保存：室温保存，一年内有效。
产品说明：碱性条件下，蛋白将 Cu2+还原为Cu+,Cu+与 BCA 试剂形成紫颜色的络合物，吸光度强度与蛋白浓度成正比。测定其在 562nm 处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。
1.准确灵敏，线性范围广，BCA 试剂的蛋白质测定范围是 20－2000μg/ml。
2.快速：45分钟内完成测定。
3.经济实用：在微孔板中进行测定，可大大节约样品和试剂用量。
4.不受样品中离子型和非离子型去污剂影响。
5.检测不同蛋白质分子的变异系数远小于考马斯亮蓝法蛋白定量。
注意事项：
1.低温或长期保存，若发现 BCA 试剂 A或者试剂 B 有沉淀发生。请 37ºC 温育并伴随搅拌促使其充分溶解。如发现细菌污染，则应丢弃，避免对实验结果造成影响。
2．不受大部分样品中的化学物质的影响，可以兼容样品中 5%的SDS，5%的Triton X-100，5%的Tween 20，60，80 等。(详情见附录)
3 每次测量蛋白浓度均应做标准曲线。
4.当试剂 A和 B 混合时会有浑浊，混匀后就会消失。
5.需准备 37℃水浴或温箱、酶标仪或普通分光光度计，测定波长为540-595nm 之间，562nm 最佳。酶标仪需与 96 孔酶标板配套使用。使用分光光度计测定蛋白浓度时，试剂盒测定的样品数量会因此而减少。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。
6.使用 BCA 蛋白测定法测定时颜色会随着时间的延长不断加深，并且显色反应的速度和温度有关，因此需注意保持定时和定温，以确保精确定量。
7.实验操作规范，提高上样量的精确度。
使用方法：
一．配制 BSA 标准品
注：标准品稀释液为蛋白样品的溶解液，原则上蛋白样品在什么溶液中，标准品也宜用什么溶液稀释。但也可用0.9%的NaCl或1×PBS 进行稀释。
二.配制 BCA 工作液
A.计算所需要的总 BCA 工作液体积。
总 BCA 工作液体积=(标准品+待测样品)×重复数×每个样品所需要的BCA 工作液
注意：试管法检测时每个样品加 2.0ml BCA 工作液，微孔板检测每个样品加 200μl BCA 工作液。
B.配制 BCA 工作液：50 体积的BCA 试剂 A 中加入 1 体积的BCA 试剂 B(A:B=50:1)，充分混匀。
注意：BCA 试剂 B 加入 BCA 试剂 A 中后，迅速浑浊，通过混匀后立即变澄清。BCA 工作液装入密封容器内，室温条件 24h 稳定。
三.试管法(样品：BCA 工作液=1:20)
1.各取 100μl 标准品和待测样品加入到反应管中。
2.每管加入 2.0ml BCA 工作液，混匀。37℃孵育30min。
注意：也可室温孵育2h，或者 60℃孵育30min。BCA 检测蛋白浓度，延长孵育时间会加深颜色反应。升高温度会加快显色反应。但是温度升高和时间延长会降低检测下限，以及降低工作线性范围
3.冷却到室温。在分光光度计上进行检测，设定波长为562nm。用装满水的比色皿对仪器校零。然后在 10分钟内对所有样品读数。
注意：由于 BCA 反应达不到真正的反应终点，即使温度降低至室温生色反应液会继续。但是，由于室温下生色比率相当低，因此若是 10min 内能对所有的样本进行 562nm 吸光度的测试，不会导致明显错误。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度 μg/ml；
Y-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度。
四.微孔板法(样品：BCA 工作液=1:8)
1.各取 25μl 标准品和待测样品加入到微孔板中。
注意：样品与工作液比例为1:8，若样品有限，可使用 10μl 标准品和待检测样品进行检测(即 1:20)，这时试剂盒的检测范围为125-2000μg/ml。
2.每孔加入 200μl BCA 工作液，振荡 30s 充分混匀。盖上微孔板，37℃孵育30min。
3.冷却到室温，在酶标仪上的540～595nm 波长范围处检测吸光度，其中 562nm 波长为最佳。
注意：延长孵育时间或者提高样品：BCA 工作比会增高每个孔的OD562nm 净值，并且降低检测下限和工作线性范围。
4.根据 BSA 标准品的吸光度(减去标准品中空白孔的OD 值即最终的读数)，绘制标准曲线(X-蛋白浓度 μg/ml；
Y-最终的OD562nm)。依据标准曲线和样品的稀释倍数计算样品蛋白浓度
产品特点：
1.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜，柱与柱之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方，将溶胶和结合两种功能统一，因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况，节省了需购买多种试剂盒的费用，
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果，大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性，即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便，不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂，也不需要乙醇沉淀。
(3S,4R)4Acetoxy3[(R)1(tertbutyldimethylsilyloxy)ethyl]azetidin2one4酰环76855691
FmocLaspartic acid 4benzyl esterFMOCL天门冬β苄86060846
4Methyl2pentanol异108112
NA兰胶指示剂 变色硅胶
NAN正2
5Methoxy2mercaptobenzimidazole2巯5并咪唑37052781
BOCLYS(AC)OH HCLN叔羰赖55757603
3tertButoxy3oxopropanoic acid叔二40052139
Cyclopropylamine环765300
4Methoxyisophthalic acid4异酞2206431
ALPHABOSWELLIC ACID香471669
4(Trifluoromethyl)Lphenylalanine4三L114926384
Ceric ammonium nitrate铈铵16774213
Dichlorodimethylsilane二二硅75785
Olmesartan奥美沙坦144689247
SDSPAGE Loading Buffer(2X)　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
SDSPAGE蛋白上样缓冲(5X)　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
SDSPAGE Loading Buffer(5X)　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
Western二抗稀释　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
Secondary Antibody Dilution Buffer　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
SDSPAGE分离胶缓冲(4X)　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
Separating Gel Solution（4X）　含量：≥ 98%　规格：20mg/支
葡聚糖凝胶 LH20　含量：　规格：20mg/支IGF-II大鼠胰岛素样生长因子-Ⅱ小鼠抗酒石性磷酶5b(TRACP5b)原装、分装TLC法鉴别
ICAM-I大鼠细胞间粘附因子-Ⅰ小鼠葡萄糖依赖性胰岛素释放多肽（GIP）ELISA试剂盒原装、分装TLC法鉴别
VCAM-1大鼠血管内皮细胞间粘附因子-1小鼠糖原磷化酶同工酶II（GPII）原装、分装TLC法鉴别
L-selectin大鼠可溶性L-选择素小鼠糖原磷化酶同工酶MM（GPMM）原装、分装TLC法鉴别
E-selectin大鼠可溶性E-选择素小鼠糖原磷化酶同工酶BB（GPBB）原装、分装TLC法鉴
BCA蛋白浓度测定试剂盒 48T/96T进口、国产1620AstemizoleStandard（标准）
48T/96T进口、国产1620AtenololHPLC≥97%
48T/96T进口、国产1620AtorvastatinCalciumHPLC≥98%
Azithromycin48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
AzithromycinIdentity48T/96T进口、国产1620≥98%
Desosaminylazithromycin48T/96T进口、国产1620HPLC≥98%
N-Demethylazithromycin48T/96T进口、国产1620HPLC≥99%
操作步骤：
1. 样品染色
1) 将Binding Buffer（10×）稀释成1×Binding buffer工作液备用（1ml Binding Buffer（10×）需加入9ml无菌去离子水）。
2) 对于悬浮细胞，500-1000g离心5min收集细胞。
对于贴壁细胞，要用不含EDTA的胰酶消化细胞，胰酶消化时间不宜过长或过短，最好是在轻轻吹打可以使贴壁细胞吹打下来时，加入细胞培养液，将细胞轻轻吹打下来，转移到离心管内，500-1000g离心5min收集细胞。
3) 收集细胞后，加入预冷PBS溶液轻摇或用移液器轻柔吹打洗涤，离心收集细胞，共洗涤两次。
4) 在细胞沉淀中加入1×Binding buffer工作液，重悬细胞，使细胞浓度达到1×106 cell/ml。
5) 吸取100μl细胞悬液（细胞总数为1×105 cell）至一新管中，加入5μl Annexin V-FITC和5-10 μl PI，轻轻混匀，室温避光孵育15min。
2. 样品检测
1) 流式细胞仪检测：
染色孵育后，每管加入400μl 1×Binding Buffer工作液，混匀后使用流式细胞仪检测（1小时内检测）。
建议设置经凋亡诱导的正常细胞、PI单染和Annexin V-FITC单染3个对照组，正常细胞组可作为荧光补偿调节去除光谱重叠和设定十字门的位置。结果可用CellQuest等软件进行分析，绘制双色散点图（two-color dot plot），FITC为横坐标，PI为纵坐标。Annexin V-FITC和PI联合使用时，活细胞仅有很低强度的背景荧光，早期凋亡细胞仅有较强的绿色荧光，晚期凋亡细胞有绿色和红色双重荧光。
2) 荧光显微镜检测：
染色孵育后涂片，显微镜下观察。使用荧光显微镜上的蓝光和绿光通道分别观察FITC和PI。被Annexin V-FITC结合的细胞显示浆膜上有绿色光环。丧失细胞膜完整性的细胞，细胞核显示红色，膜上有绿色光环。