总RNA提取试剂盒

库存 ：GOY-C6328

英文名 ：TotalRNAExtractionKit

CAS号 ：详见说明书

保质期 ：有效期1年

供应商 ：上海谷研

保存条件 ：2-8℃，避光

规格 ：  盒

产品名称：总RNA提取试剂盒
别名:总RNA提取试剂盒
英文名称:TotalRNAExtractionKit
储存条件:2-8℃，避光，有效期1年
单位:盒
货号：R1200规格：50T/100T产品内容：操作步骤：1.样品处理：a.植物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨，把粉末加入到1ml裂解液中混匀。b.动物组织：取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液，用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。c.贴壁细胞：直接在培养板中加入裂解液裂解细胞，每106细胞加1ml裂解液。用取样器吹打混匀。d.细胞悬液：离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。e.血液处理：取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液，混匀后室温放置10分钟，10000rpm离心1分钟。弃上清，若沉淀含有红细胞，可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1ml裂解液混匀。2.将处理后的样品在室温放置5分钟，使得核酸蛋白复合物完全分离。3.向匀浆样品中加0.2ml氯仿，盖好管盖，剧烈振荡15秒，室温放置3-5分钟。4.2-8℃12000rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中，把水相转移到新管中，不要吸到沉淀。5.吸附柱前处理：在吸附柱中加入500ul洗柱液，室温放置2分钟，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。6.第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀，加入吸附柱静置2分钟，2-8℃12000rpm离心2min，弃废液。7.向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。8.向吸附柱中加入600ul漂洗液，2-8℃12,000rpm离心2min，弃废液。9.12000rpm离心2min，弃掉收集管，将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。10.将吸附柱放入新管中，向膜中央滴加50-100ulRNasefree ddH2O，室温放置5min，12000rpm室温离心2min即得到RNA。注意事项：1，所有相关器皿耗材都应为RNase-free产品，操作过程要小心，带口罩、手套避免环境中RNA酶污染样品。2，RNA在水溶液中OD值可能在1.5-1.9之间，但这并不表示RNA不纯，需电泳检测。
作用及原理：
⒈溶液I—溶菌液：
溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。
葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。
EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基）;（2）EDTA的存在，有利于溶菌酶的作用，因为溶菌酶的反应要求有较低的离子强度的环境。
⒉溶液II－NaOH－SDS液：
NaOH：核酸在pH大于5，小于9的溶液中，是稳定的。
但当pH＞12或pH＜3时，就会引起双链之间氢键的解离而变性。
总RNA提取试剂盒在溶液II中的NaOH浓度为0.2mo1／L，加抽提液时，该系统的pH就高达12.6，因而促使染色体DNA与质粒DNA的变性。
SDS：SDS是离子型表面活性剂。它主要功能有：
（1）溶解细胞膜上的脂质与蛋白，因而溶解膜蛋白而破坏细胞膜。
（2）解聚细胞中的核蛋白。
（3）SDS能与蛋白质结合成为R-O-SO3-…R＋-蛋白质的复合物，使蛋白质变性而沉淀下来。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用，所以在以后的提取过程中，必须把它去除干净，防止在下一步操作中（用RNase去除RNA时）受到干扰。

根据不同浓度的氯化钠溶液对DNA和蛋白质的溶解度不同原理，可以在提取不同类型DNA使用中加以利用。
1.Nacl是常用的盐析材料之一，盐析即在高浓度Nacl溶液中，蛋白质析出的现象。原理如下
（1）Nacl溶液与蛋白质争夺水分子，破坏蛋白质胶体颗粒表面的水膜；
（2）Nacl溶液大量中和蛋白质颗粒上的电荷，从而使水中蛋白质颗粒积聚而沉淀析出；
2.不同浓度下DNA分子构象（三维结构）不同，不同的构象溶解度也不同。
（1）当NaCl溶液的浓度为0.14mol/L时，DNA溶解度最小，因此改变NaCl溶液的浓度既能使DNA溶解也能使其析出；
（2）DNA在不同浓度的氯化钠溶液中随着氯化钠的浓度不断升高；

3.所以可以使用适当的高浓度Nacl溶液，使得蛋白质析出，而DNA溶解度较大，通过高速离心，取上清并去除沉淀，进而去除蛋白质。
DNA沉淀剂：
原则：不与DNA反应，对其无影响。
1.纯乙醇（二倍体积比）；效率高，需要放置的时间短，在公司用Kit提取的时候，没有放置直接进行下一步；确定是价格相对昂贵。
2.95%乙醇，价格相对于纯乙醇便宜，但是会损失DNA；
3.异丙醇（0.6倍体积）；
（1）普通细胞上清液体，静止15-30min即可沉淀；
（2）对于含量低，或者组织（比如我现在经常提取的小鼠的肝脏中的Total和cccDNA），则最好在-20℃放置2h或者以上，
本人提取肝脏组织DNA时候，最长时间放置了三天，对结果并无影响；上周提取细胞中cccDNA的时候，室温放置了15min，结果提出的DNA含量也挺高的，而且之后的Southern结果也很成功。我猜测可能是含量高，所以时间短点也可以，但是如果时间不是很着急，还是按照规定的时间来做比较保险。
以下是公司正在热销的产品：
PRKAB1 Polyclonal Antibody 种属 Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk英文: PRKAB1 Polyclonal Antibody 模式菌株no
SAA4 Polyclonal Antibody 种属 Colletotrichum│orbiculare (Berk. & Mont.) Arx英文: SAA4 Polyclonal Antibody 模式菌株no
COL4A3BP Polyclonal Antibody 种属 Streptomyces│virginiae Grundy et al.英文: COL4A3BP Polyclonal Antibody 模式菌株no
PACSIN3 Polyclonal Antibody 种属 Phytophthora│capsici Leonian英文: PACSIN3 Polyclonal Antibody 模式菌株no
CLPS Polyclonal Antibody 种属 Streptomyces│cyaneogriseus Yan et al.英文: CLPS Polyclonal Antibody 模式菌株no
DNAJC10 Polyclonal Antibody 种属 Streptomyces│flavus Waksman et Henrici英文: DNAJC10 Polyclonal Antibody 模式菌株no
RPSA Polyclonal Antibody 种属 Alternaria│sp.英文: RPSA Polyclonal Antibody 模式菌株no
CDH11 Polyclonal Antibody 种属 Psathyrella│candolleana (Fr.) Maire英文: CDH11 Polyclonal Antibody 模式菌株no
OPA3 Polyclonal Antibody 种属 Balansia│take (Miyake) Hara英文: OPA3 Polyclonal Antibody 模式菌株no
TBX22 Polyclonal Antibody 种属 Scleroderma│polyrhizum (J. F. Gmel.) Pers.英文: TBX22 Polyclonal Antibody 模式菌株no
VPS36 Polyclonal Antibody 种属 Isaria│cicadae Miq.英文: VPS36 Polyclonal Antibody 模式菌株no
C5 Polyclonal Antibody 种属 Isaria│cicadae Miq.英文: C5 Polyclonal Antibody 模式菌株no
ERK1/2 Monoclonal Antibody 种属 Gliocladium│virens J. H. Mill. Giddens & A. A. Foster英文: ERK1/2 Monoclonal Antibody培养方法
CALM2 Polyclonal Antibody 种属 Pestalotiopsis│funerea (Desm.) Steyaert英文: CALM2 Polyclonal Antibody 模式菌株no
CBX3 Monoclonal Antibody 种属 Haematonectria│haematococca (Berk. & Broome) Samuels & Rossman宿主: Mouse 模式菌株no
DLST Polyclonal Antibody 种属 Rhizobium│sp.(Acacia rhizobia)英文: DLST Polyclonal Antibody 模式菌株no
总RNA提取试剂盒小鼠白介素15受体复合物elisa检测试剂盒
英文名称:Mouse IL-15/IL-15R Complex ELISA KIT
反应性:Mouse
样品类型:Serum, plasma, Cell culture supernatant
灵敏度:60 pg/ml
检测目标:IL-15/IL-15R Complex
应用:Sandwich ELISA