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文献和实验
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供应商 ：传秋生物
样本 ：详询
库存 ：500
标记物 ：详询
适应物种 ：详询
应用 ：检测细菌污染
检测方法 ：荧光定量PCR法
检测限 ：详询
规格 ：120T
我们提供免费的试用装，老师可以联系我们，索取试用装进行试用！【产品名称】 细菌核酸检测试剂盒(荧光定量PCR法）
Detection Kit for Nucleic Acid of bacteria (Fluorescence quantitative PCR)
【包装规格】
500次反应/盒
【预期用途】
本试剂盒用于定性检测细胞中细菌污染情况，主要用于检测临床放行前的终产品细胞是否受细菌污染，但不能用于鉴定细菌种类。
【检验原理】
本试剂盒选用针对细菌同源基因片段16s rRNA设计特异引物，本试剂盒利用SYBRGreen荧光染料能与引物扩增的DNA摸板发生特异性结合，在PCR扩增过程中，通过荧光信号，对PCR进程进行实时检测，荧光信号的增加与PCR产物增加完全同步。
【主要组成成份】
| 序号 | 组分名称 | 装量 | 管数 | 主要成份 |
| 1 | PCR反应液 | 10 ml | 10 | 含引物、Taq酶、buffer、dNTP、MgCl2 |
| 2 | 阳性对照 | 1ml | 1 | 细菌培养物 |
| 3 | 阴性对照 | 1ml | 1 | Nuclease-free 水 |
| 4 | 标准品 | 100 μl | 1 | 重组质粒(108拷贝/μl) |
| 5 | 1×TE buffer | 1ml | 1 | Tris-HCl和EDTA |
| 6 | 参比染料 | 1ml | 1 | ROX Reference Dye |
【储存条件及有效期】
试剂储存在-20℃保存，产品有效期为12个月，未使用完的试剂继续冷冻保存不影响其稳定性。短期储存4℃可保存一个月。试剂反复冻融不得超过5次。
【适用仪器】
具有SYBR荧光检测通道的ABI 7300/7500、ABI 7500 Fast、LightCycler 480等实时荧光定量PCR仪。
【样本要求】
检测样本类型为细胞上清或细胞悬液，检测对象是临床放行的终细胞产品，在准备好放行细胞的同时取细胞上清检测。样本收集在无菌的1.5ml EP管中，样本量1ml。样本在检测前可放与4℃ 24h，如若长期放置，可在-20℃以下存放。
【检验方法】
- 标准曲线制备（阳性区）
| 编号 | 1×TE buffer用量 | 标准品用量 | 拷贝数 | |||
| 1 | 1` | 9 μl | 9 μl | 1 μl标准品 | 1 μl标准品 | 107 copies/μl |
| 2 | 2` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品1 | 1 μl样品1` | 106 copies/μl |
| 3 | 3` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品2 | 1 μl样品2` | 105 copies/μl |
| 4 | 4` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品3 | 1 μl样品3` | 104 copies/μl |
| 5 | 5` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品4 | 1 μl样品4` | 103 copies/μl |
| 6 | 6` | 9 μl | 9 μl | 1 μl样品5 | 1 μl样品5` | 102 copies/μl |
- 阳性对照处理（阳性区）
- 样本处理（样本处理区）：
（2）阴性对照取出20 μl，100℃水浴或金属浴处理10 min，12000 rpm离心5 min，备用。
3. 加样（试剂准备区）
从试剂盒中取出 PCR反应液，在室温下融化，振荡混匀，PCR反应体系如下，阴性、阳性对照反应体系与其一致：
| 组分名称 | 加样量 |
| PCR反应液 | 18.5 μl |
| 参比染料 | 0.5 μl |
| 模板 | 1 μl |
| 总体积 | 20 μl |
| 组分名称 | 加样量 |
| PCR反应液 | 17.5 μl |
| 参比染料 | 0.5 μl |
| 阳性对照 | 1 μl |
| 待检测样品 | 1 μl |
| 总体积 | 20 μl |
将反应试剂混匀后简短离心离掉壁上液体，各反应管按一定顺序放入PCR仪上，按以下程序进行PCR扩增：
| 阶段 内容 | Stage1 （预变性） |
Stage2 （PCR反应） |
Stage3 （扩增产物熔解曲线） |
|||||
| 温度 | 95℃ | 95℃ | 58℃ | 72℃ | 95℃ | 60℃ | 95℃ | 60℃ |
| 时间 | 10min | 20s | 30s | 30s | 15s | 1min | 15s | 15s |
| 循环数 | 1 | 40 | 1 | |||||
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