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文献和实验
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库存 :20
英文名 :Flos chrysanthemi
保质期 :一年
供应商 :上海信裕生物科技有限公司
保存条件 :-20℃
菊花PCR鉴定试剂盒
Flos chrysanthemi. PCR Kit
产品及特点 Flos chrysanthemi. PCR Kit
本产品包含Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液,浓度为2×。具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点,可最大限度的减少人为误差。使用时只需加入DNA模板和引物既可。使用方便快捷,能避免PCR操作过程中的污染,使用时只需取适量2×TaqPCR MasterMix溶液,加入模板和引物,并加入去离子水补足体积,使MasterMix溶液浓度为1×即可进行反应。使用前请保证充分溶解并混匀,操作需在冰上进行。
Taq:扩增效率最高的耐热 DNA 聚合酶,其扩增速度约为 1-2kb/min。扩增碱基出错率为 10-5 左右。其产物未端带有 A,可直接用于 TA 克隆。
Pfu:目前保真度最高的耐热 DNA 聚合酶,碱基出错率为 10-6,但扩增效率低于 Taq 酶, 一般能很好的扩增 2kb 以下的片段。其扩增速度约为 500bp/min 左右。其产物为平未端,须加 A后才可用于 TA 克隆。
Taq Plus:Taq 和 Pfu 的等比混合物。集扩增效率高和保真度好于一身。扩增效率比 Pfu 高, 保真度比 Taq 好。其扩增速度约为 1000bp/min 左右。其产物未端带有 A,可直接用于 TA 克 隆。 含染料 PCR MasterMix 反应完后可以直接电泳检测。不含染料的 PCR MasterMix 反应完后 加入上样缓冲液后电泳检测。
产品名称 | 方法 | 规格 | 价格 |
菊花LAMP试剂盒 | LAMP | 50次 | 2490元 |
菊花PCR试剂盒 | PCR | 50次 | 1490元 |
菊花染料法荧光定量PCR试剂盒 | 染料法 | 50次 | 2490元 |
菊花探针法荧光定量PCR试剂盒 | 探针法 | 50次 | 3490元 |
1. 即开即用,用户只需要提供 DNA 模板。
2. 引物经过精心优化,专一性强,只扩增菊花,与其他微生物没有交叉反应。
3. 提供阳性对照,便于区分假阴性样品。
4. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳。
5. 本试剂盒足够做 40μL 体系的 PCR 50 次,但只能用于科研。
规格及成分
成分 | 编号 | 十孔盒包装 |
PCR MagicMix 3.0 | 试剂一 | 1 mL(红盖) |
超纯水 | 试剂二 | 1 mL(亮黄色) |
菊花PCR引物混合液 | 试剂三 | 100 μL(白盖) |
菊花PCR 阳性对照 (1×10E8 拷贝/μL) |
试剂四 | 50 μL(黄盖) |
核酸释放剂(试用装) | 试剂五 | 20 次(1 mL,绿盖) |
使用手册 | 试剂六 | 1 份 |
自备试剂:样品 DNA。
使用方法:
一、样品 DNA 的制备
1. 用自选方法纯化 N+2 个样品的 DNA,本试剂盒跟市场上大多数核酸提取试剂盒兼容。本试剂盒免费赠送20 次核酸释放剂试用装,其使用手册可以从本公司网站订购核酸释放剂。
2. 如果有 N 个样品,则需要做 N+2 个提取,包括一个样品制备阳性对照和一个样品制备阴性对照。样品制备阳性对照是在适量水(取决于试剂盒要求的样品起始量)中加 10μL 补骨脂 PCR 阳性对照的 1000 倍稀释液而得,样品制备阴性对照是直接用水。提取结束后最后得到模板 DNA 放冰上待用。
二、设置 PCR 反应(40μL 体系)
3. 对 N+2 个样品,在 PCR 时需要增加一个 PCR 阳性对照和一个 PCR 阴性对照,故需要设置 N+4 个反应。在 N+4 个 PCR 管中分别加入下列成分:
成分 | N+2 个样品管 | PCR 阴性对照 | PCR 阳性对照 |
PCR MagicMix 3.0 | 各 20 μL | 20 μL | 20 μL |
菊花PCR引物混合液 | 各 2 μL | 2 μL | 2 μL |
N+2 个样品 DNA 模板 | 各 18 μL | -- | -- |
PCR 阴性对照(水) | -- | 18 μL | -- |
PCR 阳性对照(菊花PCR阳性对照的 1000 倍稀释液) |
-- | -- | 18 μL |
- 按下表设置 PCR 反应:
过程 | 温度 | 时间 |
预变性 | 95℃ | 5 min |
PCR 反应(35 个循环) | 95℃ | 15 sec |
57℃ | 15 sec | |
72℃ | 40 sec | |
最后延伸 | 72℃ | 10 min |
5. 取 10-20 μL PCR 产物。电泳检测 PCR 产物。本产品提供的 PCR Mix在扩增结束后可以直接上样,不需要另外再加 loading buffer。PCR 产物阳性对照必须有预期条带出现,阴性对照必须无任何扩增,否则实验无效。对没有扩增产物的样品,可以稀释 10 倍后重复 PCR 扩增以排除 PCR 抑制剂的感染。
菊花PCR试剂盒常见问题与解决方法:
常见问题 | 可能原因 | 解决方法 |
阳性对照、待测样本均无条带。 |
PCR反应体系或反应条件不合适。 | 使用梯度PCR摸索PCR反应条件。 |
PCR试剂保存不当失去活性。 | 2× PCR Mix应保存于-20℃,使用时避免反复冻融。若使用频繁,可在4℃短时间存放。 | |
引物设计问题。 | 尝试重新设计引物进行检查。 | |
阳性对照有目的条带,待测样本无条带或条带弱。 |
不当储存或长期储存引起试剂活性丧失。 | 使用新鲜的试剂。 |
加入组织裂解液过量。 | 增大反应体系,或减少裂解液的用量。 | |
样本裂解混合液保存不当或保存时间过久,DNA基因组已经降解。 | 裂解混合液液可在4℃保存2-3天,尽量使用新制备的裂解液混合液进行PCR。 | |
模板加入量不适合。 | 在反应体系10-20%范围内优化模板加入量。反应效性能较差时,可以降模板浓度调节到低于10%的范围。 | |
PCR循环数不足。 | 适当增加PCR的循环数,推荐在35-40循环为佳。因为模板复杂,一般PCR反应要比用纯化的 DNA模板多5-10个循环为佳。 | |
非特异性扩增 |
PCR退火温度太低,循环数、引物浓度或模板浓度太高。 | 增加PCR退火温度,降低PCR循环数、引物浓度或模板浓度。 |
PCR引物错配。 | 重新设计PCR引物。 | |
配制PCR反应体系时温度太高或配制完成后放置时间太久。 | PCR反应体系的配制在低温下进行,配制完成后尽快进行PCR扩增反应。 | |
阴性对照出现目的条带 |
操作工具或试剂污染。 | 实验所有试剂或器材均应高压灭菌。操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。 |
样本间交叉污染。 | 每个取样器只对一个样本使用;或取完一个样本后,将取样器刃口浸入2%的次中,反复涮洗,然后用干净的纸巾擦干残液。 |
特别提示:本公司的所有产品仅用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
上海信裕生物科技有限公司
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